摘要:为了探讨日本血吸虫成虫抗原(SWA)对LX-2细胞NLRP3炎症小体活化和纤维化相关基因表达的影响,以及活性氧(ROS)在其中的作用,本文首先采用不同浓度(0、25、50、100μg/mL)的SWA刺激LX-2细胞,通过实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和Western blot检测细胞中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、 α-SMA和ColⅠ的基因和蛋白表达,ELISA检测细胞IL-1β 的分泌水平;同时使用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测细胞活性,乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒检测细胞LDH的释放;流式细胞术检测SWA刺激对LX-2细胞中ROS产生的影响;之后使用ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)处理细胞,检测NLRP3、IL-1β、Caspase-1、 α-SMA、ColⅠ基因和蛋白的表达水平.结果显示,当SWA的浓度达100μg/mL时,LX-2细胞内NLRP3、Caspase-1、IL-1β、 α-SMA和ColⅠ的mRNA的表达与对照组相比均明显升高,同时相关蛋白的表达和IL-1β的分泌也显著升高.流式检测结果显示,SWA刺激LX-2细胞后能显著增加细胞内ROS的生成,并在NAC处理后,可见明显抑制细胞内ColⅠ和炎症小体活化相关的基因和蛋白的表达.结果提示,SWA可以诱导LX-2细胞内炎症小体活化和胶原表达,并且ROS反应可能在介导NLRP3活化中发挥重要的作用.
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