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【摘要】 药品常规检验中微生物学检查最为重要,只有进行方法学验证才能保障检查方法的检验结果的准确性和检查方法的科学性。对目前药品微生物检查验证试验中现存的问题提出自己的质疑和建议,进一步完善微生物检查验证试验的限度检查标准,为建立有效的药品质量保障体系,加强规范管理。以防止药品安全监管失控现象。
【关键词】药品;微生物检查验证试验;问题及建议
几乎所有药品在应用于临床前都要进行安全性检查,一般分为“微生物限度检查”和“无菌检查”,其中最重要的检查方式就是微生物检查验证试验。检查项目包括:酵母菌数、细菌数、控制菌、霉菌数检查。检查非规定灭菌制剂及原料、辅料受微生物污染程度的方法为微生物限度检查法。检验药典要求无菌的药品是否无菌的检查方法称之为无菌检查法。检查项目包括:厌氧菌、需氧菌以及真菌检查。自1980年颁布《药品卫生检验方法》以来方法基本成熟,1995年颁布的《中国药典》又提升为国家标准。经过多年的实践,最明显的是标准中的可操作性不够、不统一、不集中等问题。
一、目前的现状分析
1、检查验证试验来源:目前大部分企业还没有进行此项工作,其中冷门产品、老产品更是没有进行此项检查,药品检验所抽查时也找不到相应的检验方法。有的畅销产品、新产品正在试验中,但也无法提供此项检验的方法。有的企业已经完成检验但以技术保密为由而不愿意提供给药品检验所,担心如按此方法检验产品不合格给自己找麻烦。这样使得食品药品监督管理部门很难正常实施监督的权力。
2、检查验证方法的执行:“药品生产企业必须对其生产的药品进行质量检验,不符合国家药品标准或者不按照省、自治区、直辖市人民政府药品监督管理部门制定的中药饮片炮制规范炮制的,不得出厂。”这是《药品管理法》中的规定。未经微生物限度检查合格不得销售或者使用。但是实际上只要药品微生物学检查项目合格,也不论是否经过方法学检验都可以进入市场而且也不影响销售。因此,为了确保药品的使用安全性必须完善药品质量保障体系,严把生产企业源头,药品监督检验机构必须进行监督抽查,加强规范管理。基层药品监督检验所是执法机构,是执行法定质量标准的职权部门,而不是在抽验过程中探索建立新方法。
3、检查验证方法的权威性:生产企业的实验室和药品监督检验所的检验肯定有一定的不同,而且98号文件中也指出“同一个企业生产的相同品种,因原料来源不同,工艺改变或不同实验室等原因,也可能导致检测结果的差异。”比如无菌检验法中需要用黑曲霉为对照,因为黑曲霉有很大的毒性,必须用专业的净化工作台或者实验室,只有达到一定实验条件才能满足实验的要求。微生物限度检查容易受试验条件的影响,其别是对药品中微生物生长有抑制作用的成分尤为突出。“当供试品有抑菌活性时,应消除供试液的抑菌活性后,再依法检查。”是微生物限度检查法的规定。基层药品监督检验所对所检的药品中每种药品的抑菌或者抗菌程度都不清楚。生产企业大部分并不委托基层药品监督检验所进行检查验证,而且基层药品监督检验所出具的检验证明生产企业也不认可;生产企业给提供的检验方法,基层药品监督检验所也不认可。当前,很大一部分药品的微生物限度检验方法缺乏权威性。
4、建立检查验证方法困难:由于微生物培养周期长、微生物限制检验方法工作复杂,必须经过多次的试验,这就使得部分抽查工作很难在规定的周期内完成。全国各地对不同企业生产的同名称不同规格的药品、不同名称的药品、同规格不同辅料、原料、生产工艺的药品,全都建立或者审核微生物限度检验方法这一工作量是巨大的。对于一线的药品监督检验机构日常工作量更是繁多,而且从时间、经费和人力上都无法正常进行科学研究。
二、药品微生物限度检验的建议
1、药品微生物限度检验的过渡时期方法:在统一检验方法未出台前,各药品生产企业必须按照行业方法或者自己制订的内控方法对生产的药品进行“微生物限度检查”或者“无菌检查”,对于未经验证的,不予以出厂销售或者使用。各级药品监督检验机构对抽查的药品在未统一之前仍可使用原方法进行检验。
2、尽快统一微生物限度检验方法:为保障检验结果的准确性和检验方法的科学性,各生产企业都要用“微生物限度检验”或者“无菌检验”的方法。98号文件指出“不同企业生产的相同品种,特别是中成药,因原料来源、工艺、辅料的不同,药品可能表现出不同的抑菌特性”,而且随着药品的成分或者原检验条件改变都可能影响检验结果,检查方法应重新验证统一。对于同一种药品,可能存在多种微生物限度检验方法,各个方法之间在试验相对误差、检验方法科学性、检验系统的适应性、检验方法重视性、试剂、检验仪器设备的简便易得性、经济节约性等各方面都有差异。国家可以在征求生产企业和监督机构意见后,再依据现在的具体情况提出一个切实可行的方法。建立科学、可信、准确、可行的药品微生物限度检验方法,并提交给药品监督检验机构,按照品种、原料、辅料、剂型等分类报上,由国家指定的部门综合考虑各个方面因素整理出合理的验证方法并公布。
3、药品微生物限度缺项检验:药品监督工作中不能因为难以进行“微生物限度检验”或者“无菌检验”,而对规定检验的项目进行缺项检验。
4、药品微生物限度检验增加经费:“微生物限度检验”或者“无菌检验”的方法比正常检验工作需要更多的人力、财力和时间,各地负责机构应追加相应的检验试验经费。
参考文献:
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[3]田颂九,丁丽霞,田洁.国内外药典中质量标准的发展趋势简述 [J].中国药学杂志,2007(01)
我校药学院成立于2000年，自2001年起招收四年制药学专业本科，药学院经过十余年的发展，在学生培养上积累了丰富的经验，但是药物分析专业与药学专业在培养目标、培养方法上还是存在着一定差异，尤其是在毕业实习环节上有较大差异.药物分析专业旨在培养能够在药品生产、检验、流通、使用、监管及研究开发领域，从事药物分析相关工作的应用型专门人才[4]，药物分析专业的学生除了要掌握药物分析的基本知识、基本理论和基本技能外，还需要具有较强的学习能力、实践能力和创新能力，通过毕业实习来完成高质量的毕业论文则是实现这一专业培养目标的必要教学环节.毕业实习是药物分析专业学生培养的最后一个综合性实践教学环节，学生需要通过毕业实习来完成毕业论文，并最终通过论文答辩，获得学位.药学院从专业建立之初就依据专业特点及培养目标要求，遵循“提升能力，推动就业”的理念，结合学校及学院自身实际情况，制订了详细周密的实习方案.除了确保优良的实习内容、实习条件、带教老师等关键因素外，还建立了易于操作的毕业论文管理系统来保证毕业实习及毕业论文质量.在多年教育实践中，通过抓住毕业实习各阶段的关键节点，采取行之有效的质量控制举措以提高毕业论文质量，初步探索出适合我院实际的药物分析专业毕业实习模式.
2药物分析专业毕业实习的探索实践
2.1优选校外实习基地，创建高水平实习平台.优良的实践教学条件是完成毕业实习的前提与基础，药物分析专业的毕业实习对分析仪器设备及实验室要求较高，考虑到校内现有的大型分析设备、科研实验室及带教老师现状，一时难以满足近百名学生的实习所需，因此在加强校内毕业实习教学环境建设的同时，药学院在筛选现有药学专业实习基地的基础上，又进一步依托校外企事业单位进行了药物分析专业的实习基地建设.我院原有药学专业实习基地主要是以总医院、第二军医大学附属长海医院等为代表的各级医院，其中只有部分医院开展了治疗药物监测及体内药物分析等工作，除了利用这一部分实习基地外，学校又拓展了一批具有高水平药物分析仪器平台及带教老师队伍的实习基地，包括以中国药科大学新药筛选中心、军事医学科学院为代表的科研实验室，以总后勤部卫生部药品仪器检验所为代表的药品检验机构，以药明康德新药开发有限公司、睿智化学研究有限公司为代表的药物研发企业，以常州制药厂公司、丰原药业为代表的药品生产企业，这些实习基地所具有的先进的仪器设备和分析实验室为药物分析专业毕业实习提供了有力的平台保障.2.2遴选实习带教老师，推行双导师制.优秀的带教老师是学生能够完成高质量毕业设计与毕业论文的根本保证，学校与实习基地共同对带教老师的带教经验及科研经历进行综合考评，聘任具有中级以上职称或硕士以上学历、责任心强的人员作为带教老师，优先选择研究基础好、项目经费高的带教老师.原则上每位带教老师每年只带教一位实习学生，避免带教老师因分身乏术而导致实习带教质量下降.每届毕业实习完成后，由药学院组织实习单位及实习学生对带教老师进行考评，及时掌握带教老师的带教情况，实行能者上、庸者下的竞争机制.校外毕业实习是学生由学校到社会的衔接，对于学生顺利完成角色转换具有十分重要的意义，考虑到校外实习基地的带教老师通常缺少学生管理经验，药学院还为每一位实习学生指定了校内老师作为带教老师，实行毕业实习双导师制，校内带教老师还最终负责毕业论文格式审定及毕业答辩辅导工作.2.3开设相关课程，实习前强化培训.毕业实习在形式上和内容上与学校教学有很大差异，为了使学生能够更快更好地适应毕业实习，在实习前对学生进行针对性的指导则是非常必要的.药物分析专业培养方案在实习前的第6学期设置了《药学综合知识》、《药物分析实验技术》两门课程，前者由高职称教师围绕毕业实习相关的文献查阅、论文开题、论文撰写等内容对同学进行指导；后者则通过开设综合性实验，通过开放实验室的形式来强化学生对各种分析仪器设备的操作与使用，以期让学生可以在实习基地更快更好地投入实习工作.2.4利用网络论文管理系统进行毕业论文管理.考虑到学生多在校外基地实习，为了便于对毕业论文的过程进行管理，药学院采用了基于互联网的本科生毕业论文管理系统，毕业论文的选题、开题、审核、提交、修改等工作均可在系统中实现，校内带教老师与校外带教老师均可通过系统对学生的毕业论文进行指导.带教老师根据专业培养目标，结合自身的研究方向，拟定实习项目后通过论文系统递交.由药学院组织校内外专家对项目进行审批，项目经审批后即可通过系统向实习学生下达毕业论文任务书，学生在获知自己的选题后，在校内外带教老师指导下制定毕业实习计划、查阅文献、设计试验方案等，并于指定期限内录入论文管理系统，也鼓励有条件的实习基地进行开题汇报.2.5利用中期检查关键节点，及时掌控实习进度.对于为期一年的校外毕业实习，除了平时通过校内外带教老师对实习进度进行监督管理外，在中期进行实习检查也是对毕业实习及论文质量进行控制的关键步骤，通过实习中期的检查可以对学生毕业实习进度进行检查监督，及时调整试验进度，确保能够如期顺利地完成毕业论文.中期检查通常安排在每年11月份左右，由学校向实习单位发送书面的中期检查通知，再由药学院选派年级辅导员和专业教师共同至实习点对学生实习情况进行中期检查，由实习学生作课题进展汇报.通过中期检查还可以加强学院与实习基地间的沟通交流，方便学院更好地掌握学生实习及教师带教情况.2.6重视论文答辩及论文成绩复审.毕业论文答辩是对学生实习过程和实习成果进行全面评估的关键环节.在实习结束前，要求学生必须于规定时间内通过论文系统提交毕业论文，由校内外带教老师对其论文质量进行审核评分，每位同学的毕业论文除了由带教老师评分外，还要求另外两位评阅老师对其论文进行评阅评分，提交评阅意见，同时也鼓励有条件的实习单位对学生论文进行预答辩.药学院内成立答辩小组，实习学生返校后在校内带教老师指导下完成所有毕业答辩材料，并提交至论文答辩委员会进行严格的答辩资格审查，对于达不到要求的论文一律不给予答辩资格，对于经修改后达到答辩要求的论文给予安排延期答辩.学生分组进行毕业论文答辩，答辩小组专家对学生答辩过程进行打分，最终的实习成绩由带教老师评分、评阅老师评分及答辩成绩三部分组成.为了保证论文的严肃性，避免一些非正常因素的干扰，保证毕业论文质量.药学院对所有评定为优秀和不及格的论文会组织专家进行复审，对于评定为其他等级的论文也会抽取其中的10%进行复审，如有成绩评定与专家组评审结果差别较大的论文，则要进行更正并予以公示.严格执行论文评阅与答辩，把好论文答辩关口，能够提高毕业学生对论文质量的重视，并对将要开始实习的下一届学生具有警示作用.
3结论
通过毕业实习可以培养药物分析专业学生文献查阅、实验设计、数据分析处理以及综合运用专业知识的能力，而且通过毕业论文答辩还可以从侧面提高学生的计算机应用、科研写作、语言表达等能力.在《全国药学类本科专业认证实施办法》中“毕业实习与毕业论文”是衡量专业建设水平的18个二级指标之一[5].我校药学院药物分析专业毕业实习模式经过6届药物分析专业的实际运行，均顺利地完成了毕业实习任务，递交了较高质量的本科毕业论文，高水平的实习平台还有力地推动了学生就业.教育部公布的专业备案和审批结果显示，自2010年至2015年已有14所本科院校开设了药物分析本科专业，我校药学院对于药物分析专业毕业实习的探索和实践也为兄弟院校本专业的实习工作提供了参考.
参考文献：
〔1〕胡颖廉.监管和市场:我国药品安全的现状、挑战及对策[J].中国卫生政策研究,2013(07):38-44.
〔2〕毕井泉.用“四个最严”保障食品药品安全[J].行政管理改革,2015(09):17-22.
〔3〕刘维蓉.供给侧改革:医药院校人才培养的“3+X”路径[J].亚太教育,2016(30):200-201.
〔4〕梁颖,刘浩,张小红.如何培养药物分析专业学生的职业综合素质[J].科技创新导报,2010(25):151.
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1. 检验人员上岗前的培训
1.1丰富自己的知识，开拓自己的视野，提高自己的知识层次。检验医学与医学检验的提法不只是次序上的差别。前者说明检验工作研究的目的，已开始由单纯的检验医学方向倾斜，这就要求检验人员要主动适应临床，参考临床的诊断和治疗标准，这是一个质的提高。
1.2加强专业知识与技能训练，提高自身业务素质。现在许多实验项目都有相应的试剂盒供应，试剂的人工配制减少了，操作步骤简化了，这不等于要求降低了。相反随着高新的技术在医学检验中的应用，技术人员培训显得尤为重要，先进的分析仪器更需要高素质人员的使用。
2. 标本采集的质控
2.1采血器材的选用。20世纪40年代初，真空采血技术的发明，在很大程度上减少了溶血的可能。真空采血系统由于其干净、安全、简单、可靠的特点已在世界范围内被广泛采用，并被认为采血的标准器械。
2.2采血量多数情况下，静脉血样的质量取决于血液和抗凝剂的比例。血液的比例过高时，由于抗凝剂相对不足，造成血浆中微血块的形成，影响一些检查指标，微凝块还可能堵塞检验仪器。采血相对过多时，试管剩余空间少，造成血液和抗凝剂混匀困难。血液比例过低时，抗凝剂相对过剩，对很多检验会造成严重影响。
2.3采血的部位当重症病人输液时，通常胳膊上有静脉输液装置，就应首先考虑是静脉输液装置的对侧采血，使血液受静脉输液稀释影响减小。目前，国内专家多次强调，使用血液分析仪尽量使用静脉血，由于静脉血和末梢血分布不同，所得测定值也有差异。指头采血常规检测时准确性和重复性差，WBC技术明显增高，血小板计数明显降低。
2.4标本的送检、寸贮和处理
2.4.1血样的运输 尽量减少运输和贮存时间，做到尽快处理和检验，时间耽误的越少，检验结果可靠性越高
2.4.2血样的储存 当需要储存血样时，应遵循以下原则：1为了防止血样蒸发，应储存在封闭的容器中；2血样应低温保存，对于有些检验指标，血样不能冷冻；3血样竖直放置，可加快凝血；4避免晃动，血样产生溶血；5储存中注意避光，尽量隔绝空气；6血样深冷冻，再溶解后，应注意混匀，防止检测物质分布不均匀；7生化和免疫检验时，冰箱存储以1周为限（酶类检验除外），血液学和血液凝固检验不超过1天，毒理检验，冰箱存储应小于6周。
2.4.3血样的处理 通常未加抗凝剂的血液在30—60分凝血后析出血清，急诊时使用含凝血酶的真空试管采血，5分钟后即析出血清。血液凝固检验时，应以2000转/min离心15分钟。
3. 溶血、试剂、用药的干扰
3.1溶血分为显性溶血和非显性溶血。显性溶血对大部分RBC中血红蛋白释放出来，非显性溶血，血小板溶解而没有血红蛋白的改变，血红蛋白比色分析法有干扰，因而血红蛋白在540nm左右有光的吸收，血红蛋白被氧化生成高铁血红蛋白以后，其在540nm吸收降低，因此可能影响测定结果。
3.2药物的影响 药物对生化检验的影响是错综复杂的。一种药物可以影响多项生化检验结果，不同的药物可以对同一项生化检验产生同样的影响；如阿司匹林能增加吸收及释放类固醇，抑制三羧酸循环，使血糖增高，但在糖尿病人和中毒剂量时，可见血糖降低，也有同一种药物在用药期间前后产生不同的影响，例如在开始使用肾上腺素时，因其促使肝中钾释放，使血钾量暂时升高，继则可见血钾降低。
3.3试剂的影响 影响试剂盒质量的因素证据：1内在因素，原材料，由厂家决定；2外在因素：主要在试剂的运输，贮存3贮存温度：2—8度。有效期已过，试剂将不能使用，每批试剂都有批验合格等；4试剂本身质量评价：看内外包装有无漏夜和破损；5临床应用效果的评价：通过测量灵敏度特异性进行评价。
4. 将枪质量控制工作、提高工作质量
4.1质量的控制 质量控制工作应贯穿于整个临床检验工作中，不能撇开日常工作，单纯去搞所谓“质控”。只有这样，才能不断从工作中总结经验教训，有助于提高实验室的整体水平。
4.2室内质量控制的审核
4.2.1人工审核 对检验数据值特大或特小的结果，应重点分析，必要时重复测定。查看化验结果是否与临床诊断相符。严重不符时，要慎重处理或复查，亦可参照同一病人几个项目化验结果之间有无明显矛盾等。
4.2.2计算机审核 我们可以利用计算机设计审核报告程序，专门把化验结果与临床诊断不符或不可能出现的组合模式提出来，重点审核，这样做既省时又省力。
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全书分为综述、玻璃酸的理化性质、生产工艺、分析检验、药理作用和生理功能，在化妆品和保健品、给药体系及眼科、关节疾病中的应用，预防术后粘连和对组织的修复作用以及其他共11章(66万8千字)。
该书主要有以下几个特点：
1 全面综述了玻璃酸及其衍生物的研究与应用进展，内容丰富，范围较广，信息量大。并在“其他”一章中综述了2003～2008年我国生化药物研究的进展，为生化药物的研究提供了大量的有关资料和国内外参考文献。
2 除综述外，其他内容包括理化性质、生产工艺、分析检验、药理作用和生理功能以及应用等方面，均为编者和他们的同工作者在国内外杂志上发表的原始研究论文，因此殷实可靠。在有关疾病中的应用研究，大部分对实验结果展开了讨论，有的还进行了初步评价，对玻璃酸在有关疾病中的应用提供了理论基础。
3 通过开创性的实验研究，对玻璃酸的生产工艺、理化性质、分析检验提出了新工艺、新技术和新方法。例如：在生产工艺方面首创微生物发酵工业生产方法，国内率先研制成功眼科手术用和关节腔注射用的玻璃酸注射液；在分析检验方面，通过实验建立了测定玻璃酸含量的凝胶色谱法，经过对比简化了测定特性黏度的多点稀释法，提出了一点法，使实验操作简化。经过方法学研究提出了应用较新的联用技术――MALLS-SEC测定玻璃酸的相对分子质量(Mt)，有利于玻璃酸的质量控制和进一步应用研究。在应用方面，国内首创用于外科术后防粘连和烧伤治疗等，拓宽了其应用范围。
教师根据教学内容及教学大纲的要求精心巧妙设计适当的问题，激发学生的思维，挖掘学生的探究潜能，而且做好学生所出错误的记录，以求教学艺术的进步和教学效率的提高，同时也便于教学反思，对学生共性错误的知识，寻找更有效的教学手段，变灌输者为学生学习的组织者，引导者和合作者。
2充分利用现代化教学手段，结合其他教学法
多媒体技术作为现代教育技术的重要组成部分，是优化课堂教学的有效途径之一。利用多媒体技术可使抽象概念形象化，使枯燥的内容生动化，将教学中很难表达的内容形象、生动、直观地展示出来。一方面，利用网络资源收集好的图片。另一方面，在常规临床工作中，对细菌的典型菌落及其涂片染色的镜下形态照像。从多渠道收集各种唯美的图片、动画等，使多媒体课件可以吸引学生的注意力，使学生在愉悦美妙的情景中加强对枯燥的医学知识的理解。同时，结合其他的教学方法，如病案教学法、故事教学法、讨论式教学法、亲验式教学法等。这就要求教师在日常工作中注意收集各种病案，相关的故事，以及亲身体验等。这些都会使学生印象非常深刻，从而收到很好的教学效果。
3实施分阶段教学
在实验课内容安排上，围绕“基础训练一综合设计一实验研究”三个层次优选教学内容，合理安排教学顺序。基础训练即基本知识与基本技能实验阶段：从简单的经典实验开始，使学生掌握细菌涂片的制备和染色技术，无菌操作技术，消毒灭菌技术，纯种分离技术，合成培养基制备技术等。综合性、设计性实验阶段：在教师指导下，进行较为复杂的综合性，设计性实验。如制作模拟标本，给出相关的临床资料，从准备实验开始，一切由学生自己动手，分离出可能导致感染的细菌，并根据所鉴定出的细菌，选择相应的抗菌药物做药物敏感性试验，再根据患者的性别，年龄，基础疾病，感染部位等，推荐相应的药物治疗感染。培养学生的动手能力，分析问题、解决问题的能力和综合运用药理学知识等方面的能力。实验研究：在前两个阶段的教学任务完成后，学有余力的学生可自由组合，自选题目或参与教师的科研，通过查阅相关文献自行设计实验方案，小组讨论优选出最佳实验方案，完成实验后以论文形式写出实验报告并在实验组内进行论文答辩。使学生对科研程序有一定的了解，培养其逻辑思维、语言表达、团队合作等方面的综合素质。
4利用图表总结，提高临床微生物检验教学效果
对临床常见属种细菌及真菌检验要点和难点制作图表进行总结。对常见感染部位临床细菌学和真菌学检验要点和难点制作图表进行总结。对临床常见类型标本如血液、脑脊液、尿液、粪便、痰液、穿刺液、伤口分泌物，生殖道分泌物的细菌和真菌检验流程进行总结归纳，并制作检验流程图。通过图表总结，加深学生对临床微生物检验基本理论的理解与认识，提高学生观察、思考、分析和解决问题的能力。
