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[中图分类号] R197 [文献标识码]B [文章编号] 1005-0515（2010）-12-205-01
血液标本是检验科最常见的标本之一。在血细胞分析过程中，血液中可能存在的细菌、病毒、真菌及寄生虫等病原体对实验室环境及操作人员而言是潜在的危害。本文就血液实验室潜在的生物安全危害及安全防护措施报告如下。
1 检验人员基本安全防护
检验人员应提高生物安全防范意识，进入实验室污染区后要穿工作服及专用鞋。血液标本中可能存在各种病原体，检验人员在接触标本的过程中应戴手套，且戴手套后不应再接触清洁表面。当手套破损后，手被血液污染时应立即洗手。在进行可能产生气溶胶的操作时，需进行头面部保护，如戴口罩、眼罩或帽子等。不应在实验室中穿露趾鞋。应定期对检验人员体检，建立检验人员的健康档案。工作结束要离开实验室时，使用的防护用品应先消毒，后摘除，脱去手套后须洗手。实验操作完毕后应按“六步法”正确洗手。工作服由医院统一清洗，不可带回家。检验人员不应在工作区内饮水、吃东西、吸烟、化妆、处理隐形眼镜等，不得在工作区存放私人物品，未得到批准不得在工作区内接待外来客人。
2血液标本采集及运送中的安全防护
血细胞分析标本分为静脉血及末梢血两种。静脉血采集实施一人、一针、一管、一巾、一带，条件允许的情况下，应使用与仪器匹配的一次性安全真空采血管以取代传统的针头和注射器，这样既保证了血液标本检测质量又保证了工作人员采血及操作时的生物安全。末梢血采集应做到一人、一针、一管、一片，对每位患者操作前后要认真进行手消毒。从患者身上拔出针头及真空采血管与针头分离时，要防止被针头刺伤，不要给用过的注射器针头戴护套。使用后的一次性针头、玻片应存放在耐刺、防渗漏的锐器盒内，当达到容量的3/4时就予以更换。末梢血采集时要避免血液直接接触皮肤，如手不慎接触到血液要立即洗手。采血时，可能会发生被针头刺伤的情况，存在感染乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒（HCV）、人类免疫缺陷病毒（HIV）的可能。针刺伤后是否发生感染取决于暴露时间、伤口深度、携带病毒的血量、是否接种疫苗等。血源性HBV的职业暴露最常见，而乙肝预苗的接种可减少HBV感染的风险,因此建议检验人员接种乙肝预苗，预防HBV感染[1]。标本运送应采用密闭容器盒，以确保工作人员及环境不被污染。
3 血细胞分析检测过程中的安全防护
近年来，各类血细胞分析仪的普遍使用，静脉血血细胞分析大都为全自动检测，一般无需将采血管盖子打开，加样针能直接插入采血管吸到标本，整个分析过程构成了一个封闭系统，避免了检测过程中的污染问题。血细胞分析过程中，采血管的开启、加样、振荡均能产生大量气溶胶，而全自动血细胞分析仪可以避免气溶胶扩散。气溶胶是悬浮于气体介质中固体、液体微小粒子形成的胶溶状态分散体系。气溶胶无色无味、不易发现，检验人员可在自然呼吸中不知不觉吸入而造成感染。静脉血细胞分析有时也需要手动操作，需将采血管盖子打开，此分析过程不能构成封闭系统，故不可避免的产生气溶胶，因此手动操作时建议戴口罩，可有效防止气溶胶吸入体内。多数医院的检验科，末梢血血细胞分析是手动操作加样的，开盖及混匀要轻，避免产生过多气溶胶。打开采血管时，可以用纸或纱布抓住盖子以防止喷溅。实验完成后要立即盖上采血管盖，这可以减少气溶胶的产生。手动加样时由于血液容易喷溅，建议戴口罩以防止气溶胶吸入体内。实验过程中如有血液溢出，应立即用布或纸巾覆盖，然后在上面倾倒5g/L含氯消毒剂，作用30分钟后将布或纸巾清理掉，再用1g/L含氯消毒剂擦拭污染区。实验过程中意外出现扎伤、皮肤污染血标本时，应立即用肥皂水清洗，再用大量流水冲洗伤口。根据锐器污染源的不同可采取相应的预防措施，并进行血源性传染病的检查和随访。黏膜、结膜被污染后应用大量的水冲洗。实验过程中还要防止间接传播，接触样品的手污染了操作台、仪器、物品等，都可能造成间接传播。每日工作结束后用1g/L含氯消毒剂全面擦拭消毒，每日下班后开启紫外灯对空气消毒，照射时间一般应大于30分钟。
4 血细胞分析废弃物的正确处理
实验完毕后，标本用塑料膜封好，分类放入冰箱保存。保存期满的标本存放在双层无渗透、无破损的黄色医疗废物包装袋中，当达到3/4时，封好袋口由专人签收送到废弃物放置点，统一焚烧。盛放锐器的一次性容器，应将其放入“感染性废弃物”的容器中进行焚烧,焚烧温度应高于800℃，如低于800℃就会产生二恶英、呋喃等有毒物质。用过的废液要经过处理达到无害标准后才能排放。对一次性医院废物应先消毒，再集中收回进行毁形处理。
由于工作性质特殊，血液实验室是一个与血液密切接触的地方，而血液中可能存在各种病原微生物。如检验人员缺乏生物安全意识，不加强安全防护，违规操作，可能会造成生物危害。只要检验人员能重视生物安全防护工作，对潜在的生物危害有充分认识，遵守操作规程，一定能将生物安全工作推上新的台阶。
[关键词] 肝细胞癌；血清；代谢物组；LC-MS；主成分分析；模式识别
[中图分类号] R735.7 [文献标识码] C[文章编号] 1674-4721（2011）06（a）-085-02
目前，临床上诊断肝癌的主要方法为病理、影像和血清AFP检查。这些检测手段中，病理法属于有创性检查，对患者造成组织损伤，不能作为常规检查方法；B超、CT、磁共振成像对小肝癌灶检出率较低；血清AFP检查诊断肝癌灵敏度低，因此，建立一种无损、准确、灵敏的肝癌诊断方法具有重要的临床价值。代谢组学是一种通过考察生物体系受刺激或扰动后代谢产物随时间的变化，并以此来研究生物体系代谢途径的新技术[1-2]。代谢组学作为新兴的学科，已成功应用于疾病诊断、药物作用模型的鉴别和确证、药物作用机制研究等领域[3-6]。目前代谢组学分析中常用的两种检测手段是核磁共振（NMR）技术和质谱（MS）及其联用技术。相比于NMR灵敏度低、检测动态范围窄等弱点，现代MS技术的优势是具有很高的灵敏度和专属性，可以实现对多个化合物的同时快速分析与鉴定，现已成为生物分析中的首选方法。本研究采用LC-MS法检测肝癌患者和健康人血清中代谢物，比较分析两组血清代谢物组的差异，同时利用PCA对MS数据进行模式识别，以期建立肝癌的诊断模型。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
Agilent 1100型高效液相色谱仪，Agilent LC/MSD Trap XCT Plus 型质谱仪、高压二元梯度泵、二极管检测器、自动进样器、柱温箱、Chemstations化学工作站等（美国Agilent公司），日立20PR-52D型高速冷冻离心机，电热真空干燥箱（上海申光仪器仪表有限公司），KQ- 250 DE型数控超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司），Milli-Q纯化水制备系统(Millipore公司)。甲醇、乙腈均为色谱纯（美国fisher公司）。
1.2 样品的采集
分别采集30份男性肝癌患者以及30份健康男性 （无相关病史的健康人群)受试者静脉血5 ml 至促凝管中，室温下静置1 h后在4℃、13 000 g离心10 min），置-80℃贮存备用。采血前禁食12 h。肝癌诊断标准按照2001年中国抗癌协会肝癌专业委员会修订的肝癌临床诊断标准[8]，上清液LC-MSn分析。
1.3 LC-MS 条件
反向液相色谱（RP-LC），色谱柱：Prevail C18（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；流动相A：10mM甲酸铵缓冲液（甲酸调PH 4.0）；B：0.1%甲酸乙腈，A与B梯度洗脱：0～5 min，B%10～30，5～9 min，B% 30～60，9～20 min，B%60～70，20～25 min，B%70～100；柱温：25°C；流速：0.8 ml/min；质谱条件：ESI离子源，离子源温度350℃，毛细管电压3.5 kV，雾化压力285.8 kPa，雾化压力60.0 Psi，干燥气流速11.0 L/min，质谱扫描范围75～800 m/z，正离子检出模式。
2 结果
2.1 血清样品检测总离子流图
按照以上实验方法，对血清样本进行了分析测定，图1中A、B分别是健康人和肝癌患者血清典型的LC-MS总离子流谱，图中可见，正常人血清样本的总离子流图与肝癌患者血清样本的总离子流图有明显区别。
A为健康人血清；B为肝癌患者血清
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2.2 肝癌的生物标记物
通过LC-MS检测，与正常人相比，肝癌患者血清中牛磺酸和组氨酸含量减少，而苯丙氨酸、酪氨酸含量增加。牛磺酸是重要的抗氧化物质，曾有研究报道，其在肝硬化患者血清中含量增加，而肝癌患者血清中牛磺酸含量没有改变[7]，但笔者研究发现牛磺酸在肝癌患者血清中含量减少，推测牛磺酸的含量与肝癌病情程度有关，需要进一步研究。
2.3 模式识别分析
利用PCA对正常人和肝癌患者两组血清LC-MS数据进行模式识别分析，得到相应血清标本的PCA得分图（3D PCA Scores plot)。得分图中每一个点代表了一个标本，见图2。从图2中可以直观地看出各血清标本在空间上的位置以及相互聚合程度，图2中肝癌和健康人标本显著分离，说明两者血清代谢物组确实存在显著差异。
3 讨论
为了探讨利用代谢组学技术结合模式识别分析诊断肝癌的可行性，对肝癌患者血清LC-MS数据进行PCA分析。结果表明肝癌患者可与健康人标本100%区分开来，利用基于LC-MS代谢组学技术结合PCA的模式识别方法诊断肝癌诊断结果可靠。有利于临床早期诊断、早期治疗肝癌。此外，由于代谢组学反应的是基因和蛋白表达终端的变化、是对基因组学和蛋白组学在代谢物研究上的放大，因此利用此技术诊断疾病更灵敏、快速。
[参考文献]
[1]罗和古，丁杰，岳广欣，等.大鼠肝郁脾虚证的代谢组学研究[J].中西医结合学报，2007，5(3):307-313.
[2]Jeffrey R，Idle1，Frank J，Gonzalez．Metabolomics[J].Cell Metabolism，2007， 12(6):348-350.
[3]Clayton，T.A，Lindon，J.C，Cloarec，O，et al.Pharmacometabonomic phenotyping and personalized drug treatment[J].Nature，2006，440(7087):1073-1077.
[4]黄成钢.中药研究的必然趋势—中药复方系统研究[J].中国药学杂志，2000，35(7):4331.
[5]周宏伟，谭凤仪，钟音，等.代谢组学及其在微生物领域的研究进展[J].分析化学，2007，35(2):309-314.
1.1细胞活力测定
采用Trypanblue拒染试验检测冻存前及复苏后细胞的存活率。将待检细胞制成细胞悬液，取细胞悬液与04％台盼蓝溶液以9∶1混合均匀（使台盼蓝溶液终浓度为004％），3min后观察，并用血球计数板计数。镜下观察可见健康活细胞胞体完整、细胞透明、不着色，凡着色呈蓝色者均为死细胞。计数1000个细胞，计算细胞活率。
1.2生长曲线绘制
向24孔培养板每孔内接种1mL密度约为1×104个／mL细胞，从接种之日算起，每隔24h计数2个孔内的细胞密度，算出平均值，连续测定12d，以培养时间为横坐标，以细胞密度为纵坐标，绘制细胞生长曲线。
1.3细胞染色体分析
选取第4代生长良好的新生昆明犬成纤维细胞，按照常规方法［9］进行染色体制片，Gimesa染色后选择染色体分散与形态良好的分裂相在油镜下观察拍照，作核型图，对50～100个分裂中期细胞进行染色体数目统计。
2结果与分析
2.1细胞的形态学观察
新生昆明犬耳缘皮肤组织经胶原酶分离培养3～4d后，镜下观察可见有少数细胞沿组织块边缘慢慢贴壁伸展，细胞形状不规则，且其组织块的生长晕形成时间较长。经8～10d培养才出现大量成片生长的优势细胞，此时观察细胞的形态呈长梭形、多角形或扁平星形，为典型的成纤维细胞形态。后再经3～4d细胞生长至汇合，并长满整个细胞培养瓶表面（图1A），此时可进行传代和冻存。传代后的细胞生长旺盛，在形态上与原代细胞无明显差异，经2～3d即可长至近100％汇合，此时细胞呈放射状或涡旋状走势（图1B）。待传代时，加入消化液后显微镜下可见细胞回缩，呈圆形（图1C）。
2.2成纤维细胞冻存前和复苏后的活
耳部成纤维细胞冻存前和复苏后的活率分别为933％，908％（图2）。冻存前与复苏后的细胞存活率差异不显著（P＞005），说明原代细胞和传代细胞生长状态良好，培养条件适宜，且冻存和复苏的过程对细胞活力状况损害较小。
2.3生长曲线
根据昆明犬耳部成纤维细胞接种于24孔板连续培养12d的细胞计数情况，绘制出了成纤维细胞的生长曲线（图3）。昆明犬耳部成纤维细胞的生长曲线呈典型的“S”形，即经过了潜伏生长期、对数生长期、平台期以及衰亡期。其表现为1～2d的潜伏生长期细胞总数基本保持不变，从第3天起，细胞数量开始增加，3～8d左右细胞明显地进入对数生长期，细胞数量快速增长，第8～9天，细胞由于缺乏足够生长空间而增长放缓，开始进入平台期。第9天后，由于细胞数量的急剧增加、生长空间的极大限制，经过短暂的平台期后，细胞发生接触抑制快速进入衰亡期，细胞生长几乎停止，随后细胞逐渐脱落死亡，此时镜下可见有大量凋亡细胞漂浮。由生长曲线上的数据分析，耳部成纤维细胞群体倍增时间约为32h。
2.4核型观察分析
昆明犬耳部成纤维细胞中期染色体分裂相与核型分析如图4所示：染色体数目2n＝78（XX）。计数80个4代细胞的染色体数目，总数2n＝78的细胞数约占总细胞数的90％，达到了建立细胞系75％～80％的要求，说明所建细胞系为稳定的二倍体细胞系。39对染色体中有38对常染色体均为端着丝粒（T）染色体，长度逐渐递减；性染色体X，Y均为中央着丝粒（M），X染色体的长度最大。
3讨论
目前，国内已有一些研究报道建立了比格犬胎儿成纤维细胞系［10］、德国牧羊犬耳部和腹部成纤维细胞系［11］及杂交犬皮肤成纤维细胞系［12］等，但利用犬类的这些细胞遗传资源进行更加广泛深入的研究（如医疗和动物模型的建立、体细胞克隆等）还十分欠缺。在国外，已有较多使用所建立的犬胎儿或成体成纤维细胞系进行体细胞核移植（SCNT）的研究［13－16］。值得注意的是，在警用工作犬领域，7头世界首批体细胞克隆警犬于2007年底在韩国诞生［17］，2009年韩国克隆专家根据美国911英雄警犬“特拉克”的遗传信息，再次利用体细胞克隆技术成功获得了5头牧羊犬（http：／／wwwcnwnewscom／html／tech／cnkpzs／20090621／122171html）。LEE等［18］将曾服役于韩国国家紧急事务管理署（NEMA）具有6年全球救援经验的退役搜救犬进行克隆，最终获得2头克隆犬。这些克隆后代中大多数工作犬已服役并具备与父辈同样卓越的工作性能。同时，OH等［19］的研究也表明，利用SCNT技术将能使一头优秀的检验检疫犬复制出一群同样优秀的检验检疫犬。体细胞克隆技术最大的优势在于克隆出生的动物与供体细胞来源的动物具有几乎100％相同的基因，即能完全保持亲代优异的先天特质。要成为一只优秀的警犬，就必须要具备高智商、敏锐的嗅觉、良好的亲和能力等警犬所必备的各种特质。按照传统的警犬繁育方式，培育出一头优秀警犬至少需要3～4年时间，花费约10万元，期间要消耗大量的人力、物力和时间，且培训的优秀率低，不超过12％；而要培养出一头功勋级的警犬需要付出的代价就更大，最少需数10人，4～5年时间，约50万元的费用，且培养出一头功勋级警犬的效率很低，约8‰。而动物体细胞克隆技术可以批量复制优秀、功勋级的警犬，可以大大降低培育成本，提高培养功勋警犬的培育效率。因此，体细胞核移植技术在警犬繁育中具有广阔的应用前景。然而，体细胞核移植技术首先必须要解决的是供体细胞的来源和体细胞分离培养的问题。本研究利用胶原酶消化法建立了新生昆明犬耳部成纤维细胞系，并对其体外培养的生物学特性也进行了初步的分析与探讨。在动物成纤维细胞的体外分离培养中，分离组织可以取自胎儿、新生幼仔及成体动物［20－22］。其中，胎儿取材不仅难度大、成本高，且对优良品种的保存也十分不利。相反地，新生幼仔或成体动物耳部、腹部及腹股沟等部位皮肤组织的取材则显得十分便捷，且不影响动物的健康成长。本试验取材自新生昆明犬耳缘皮肤组织（＜1cm2），对于新生仔犬，其伤口愈合快、皮肤组织修复能力强，应激性小且容易护理。另外，新生幼犬较成犬组织分化程度低，其成纤维细胞理论上应具有较强的增殖能力、易培养及适于进行相关基因操作研究。本试验所建立的新生昆明犬耳部成纤维细胞具有典型的成纤维细胞形态，如细胞呈梭形或星形，当生长至汇合时细胞会平行排列，呈涡旋状和放射状生长。其冻存前和复苏后存活率差异不显著（P＞005），细胞复苏后增殖快、生命力旺盛，且形态未发生变化。这表明冻存和复苏过程中的各项条件对细胞活力影响较小，试验中采用的冻存和复苏的方法是可行的。
[关键词]生物 细胞分析
高中生物教材（人教版）在第六章细胞的生命历程中，对细胞增殖过程中染色体（质）行为变化做了详细的分析，同时也是考试的重点。然而大部分教师对细胞分化、细胞衰老、细胞凋亡及细胞癌变过程中染色体（质）的行为变化却知之甚少。笔者在阅读了相关书籍之后，对上述问题做如下总结。
1.细胞分化与染色体（质）行为变化的关系
细胞分化的实质是组织特异性基因（奢侈基因 luxurygenes ）在时间和空间上的差异表达（differential gene express）。这种差异表达不仅涉及基因转录水平和转录后加工水平上的精确调控，而且涉及染色体（质）修饰等复杂的调控过程。这里的染色体（质）修饰主要是指DNA的甲基化。DNA甲基化（DNA methylation）是在甲基转移酶的催化下，DNA的CG两个核苷酸的胞嘧啶被选择性地添加甲基，形成5-甲基胞嘧啶，这常见于基因的5'-CG-3'序列。甲基化位点可随着DNA的复制而遗传，因为DNA复制后，甲基化酶可以将新合成的未甲基化的位点进行甲基化。DNA甲基化可以引起基因的失活，从而使细胞不需要表达的基因不表达，进而达到差异表达（选择性表达）的目的。如下图
2.细胞衰老与染色体（质）行为变化的关系
染色质固缩化是衰老细胞核中另一个重要变化。体外培养的细胞中，晚代细胞的核中可看到明显的染色质固缩化，而早代细胞的核只有轻微的固缩作用。除了培养细胞外，体内细胞，如老年果蝇的细胞等，都可以观察到染色质的固缩化。染色质固缩与染色质蛋白的二硫键数量有关。
3.细胞凋亡与染色体（质）行为变化的关系
细胞凋亡细胞的核DNA在核小体连接处断裂成核小体片段，并向核膜下或中央异染色质区凝聚形成浓缩的染色质块。随着染色质不断凝聚，核纤层断裂消失，核膜在核孔处断裂形成核碎片。凋亡细胞的核经核碎裂形成染色质块（核碎片），然后整个细胞通过发芽、起泡等方式形成一些球形的突起，并在基部绞断而脱落产生大小不等内含胞质、细胞器及核碎片的凋亡小体；或通过分隔机制形成凋亡小体。总言之，细胞凋亡最突出的生化特征是染色质DNA的有控裂解，并且是由于内源性内切核酸酶基因的活化和表达而造成的结果。这种由内源性内切核酸酶切割的染色质DN段大小是有规律的，即都为200bp的倍数。如下图
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【关键词】红细胞 生物教学
红细胞又称红血球或红血细胞，是血液中最多的一种血细胞。红细胞分为两类，一是哺乳动物的红细胞；另一类是非哺乳动物（鸟类、两栖类、鱼类）的红细胞。下面着重介绍与这两个方面相关的知识内容。
1.哺乳动物的红细胞
1.1 基因突变的实例。正常人的红细胞呈双凹圆饼状，中央较薄，周缘较厚，而镰刀型细胞贫血症患者的红细胞却是弯曲的镰刀状，这种细胞形状上的改变用光学显微镜是可以观察到。究其原因，镰刀型细胞贫血症属于基因突变的结果。而基因突变是染色体的某一位点上基因的改变，这种改变在光学显微镜下是无法直接观察到的。所以讲到基因突变就经常提及镰刀型细胞贫血症。
1.2 制备细胞膜。哺乳动物成熟的红细胞，它没有细胞核和众多的具膜细胞器，即除细胞膜外无其他的膜结构，因此可以获得较纯净的细胞膜，加之取材方便。故在 “体验制备细胞膜的方法” 实验中，被认为是最理想的材料。
1.3 研究动物细胞的吸水和失水。正常状态下红细胞内的渗透压与血浆渗透压大致相等，这对保持红细胞的形态甚为重要。加之动物细胞没有细胞壁，将红细胞置于等渗溶液（NaCl/0.9%）中，它能保持正常的大小和形态；将红细胞放在低渗溶液中，水分将进入细胞，红细胞容易吸水膨胀变成球形，可至膨胀而破裂；相反，将红细胞放在高浓度溶液中，水分将逸出细胞外，红细胞将因失水而皱缩。这些变化在光学显微镜都很容易观察到。所以，它又是研究“动物细胞的吸水和失水”的好材料。
1.4 真核细胞并非都有细胞核。真核细胞与原核细胞的区别就是前者有真正的细胞核，但并不是所有的真核细胞都有细胞核。如哺乳动物成熟的红细胞就无核，这样一来，就成了除哺乳动物成熟的红细胞等少数细胞以外，真核细胞都有细胞核。
1.5 细胞只有保持完整性才能完成各项生命活动。哺乳动物成熟的红细胞无核，所以一般不能存活多久，即寿命都很短。红细胞与健康红细胞平均寿命为120天，每天都有一定数量的红细胞进行更新。原因是细胞的各个部分不是彼此孤立的，而是互相紧密联系、协调一致的，细胞只有保持完整性，才能够正常地完成各项生命活动。这也有力地说明细胞完整性的重要意义。
1.6 体细胞并非都存在等位基因。哺乳动物成熟的红细胞无核，故不含DNA（DNA主要存在细胞核中），进而也不存在染色体，当然也就不存在等位基因。
1.7 故衰老的红细胞没有核体积变化。衰老的细胞，细胞核的体积增大，核膜内折，染色质收缩、染色加深。哺乳动物成熟的红细胞无核，故衰老的红细胞没有核体积变化这个特征。
1.8 人体的细胞并非都进行有氧呼吸的。哺乳动物成熟的红细胞中没有线粒体，也就是说没有有氧呼吸的场所，所以只能进行无氧呼吸。这也说明人体的细胞并不都是进行有氧呼吸的。
1.9 红细胞跨膜运输的方式。哺乳动物成熟红细胞内无线粒体，通过无氧呼吸释放能量，因能量的利用效率较低，所以葡萄糖进入红细胞为协助扩散；而其他细胞有线粒体能进行有氧呼吸，能量的利用效率较高，故葡萄糖进入其他细胞则为主动运输。
1.10 提取血红蛋白。血液由血浆和各种血细胞组成，其中红细胞最多。在红细胞的组成中，除水分以为，约90%是血红蛋白。故用哺乳动物成熟的红细胞提取血红蛋白。
1.11 血红蛋白和血浆蛋白。红细胞的主要功能是运输O2和CO2，此外还在酸碱平衡中起一定的缓冲作用。这两项功能都是通过红细胞中的血红蛋白来实现的。如果红细胞破裂，血红蛋白释放出来，溶解于血浆中，即丧失上述功能。血红蛋白是红细胞内部的成分，不在细胞外液（相对人体外部环境来说，又称为内环境），即血红蛋白不属于人体内环境组成成分；血浆是血细胞直接生活的环境，血浆中的蛋白质称血浆蛋白，它属于人体内环境组成成分。
2.非哺乳动物的红细胞
2.1 无丝分裂。无丝分裂是最早发现的一种细胞的分裂方式，早在1841年就在鸡胚的的血细胞中看到了。因为在分裂开过程中核膜、核仁不消失，无染色体和纺锤丝的变化，所以叫无丝分裂，它是真核细胞的一种分裂方式，如蛙的红细胞分裂方式就是这样。
2.2 提取DNA。非哺乳动物的红细胞仍然有核，含DNA。对鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分子可以大量进入血细胞，使血细胞胀裂，同时用玻璃棒搅拌，就加速了鸡血细胞的破裂，从而释放DNA，过滤后收取滤液即可。
关键词：地福来生物细胞肥；示范；增产效果分析
中图分类号 S14 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2013）24-71-02
生物肥料是作物用肥的发展方向。根据产品介绍，“地福来”活性细胞肥，利用生物固氮，能为农作物的整个生长周期提供所需的30%～50%的氮肥，即节约30%～50%的氮肥用量，作物施用这种“细胞肥”后，不仅能增加作物产量、缩短生长周期、提高品质、减少化肥使用量、改良土壤，而且能够增强作物抗逆性、抗病虫害的能力。所以，2013年笔者在枞阳县布置了3个水稻示范点。具体如下：
1 枞阳县浮山示范点示范情况
1.1 示范目的 本次示范目的是在同等的施肥管理水平下，增加水稻产量。
1.2 示范地点 枞阳县浮山乡。
1.3 示范方法 对比法。
1.4 示范情况 栽培方式：育苗移栽；品种：优Ⅰ402；用种量：2kg/667m2；4月5日播种，5月4日移栽，5月13日除草。分别于4月28日防治灰飞虱、稻蓟马；5月21日防治稻蓟马；6月20日防治稻苞虫，纹枯病。
表1 浮山地福来生物细胞肥水稻施用示范基本情况
[示范品种＼&栽培方式＼&施用时间
（月/日）＼&用肥量
（mL/667m2）＼&施肥方式＼&优Ⅰ402＼&秧田＼&4/18＼&200＼&喷雾＼&优Ⅰ402＼&育苗移栽＼&5/24＼&200＼&喷雾＼&]
6月24日，示范田早稻正处抽孕穗期，平均茎蘖15.6个，对照平均茎蘖13.6个。预计抽穗比对照早7d左右。
1.5 7月22日，对浮山示范点进行测产，结果如表2：
从表2可以看出，主要表现地福来大田专用肥示范田比对照田有效穗数多3.16万/667m2，由于分蘖穗多，示范田平均穗粒数、结实率比对照田略低，经计算产量结果得出，浮山点地福来大田专用肥示范田比对照田增产57.51kg/667m2。
表2 浮山示范点理论产量构成与产量
[处理＼&穗数（万/667m2）＼&每穗粒数＼&结实率（%）＼&千粒重
（g）＼&理论产量
（kg/667m2）＼&实际产量
（kg/667m2）＼&总粒数＼&实粒数＼&专用肥＼&17.35＼&117.86＼&106.81＼&90.6＼&25＼&463.29＼&393.8＼&对照＼&14.19＼&118.06＼&111.5＼&94.4＼&25＼&395.64＼&336.29＼&]
2 陈瑶湖示范点示范情况
2.1 示范目的 本次示范目的是在同等管理水平，施用地福来大田专用肥的示范田比对照田每667m2减少5kg氮、磷、钾含量18%的复合肥的条件下，分析增产效果。
2.2 示范地点 枞阳县陈瑶湖乡
2.3 示范方法 同一田块，共0.533hm2，一分为二，示范田、对照田各0.266hm2。进水口为对照田，出水口为示范田。
2.4 示范情况 栽培方式为点播；品种早稻嘉兴8号；用种量7.5kg/667m2；4月18日撒播。
除草时间：4月25日用36%直播净45～60g/667m2兑水45～60kg均匀细致喷雾。药后7d内保持畦面湿润状态。
5月21日，秧龄33d进行秧苗素质考察，地福来大田专用肥示范田秧苗比对照株高高8.3cm，平均分蘖数多0.4个，绿叶数、白根数等都有优势。具体情况如表4。
表3 陈瑶湖地福来生物细胞肥水稻施用示范基本情况
[处理＼& 施肥一 ＼& 施肥二 ＼& 施肥三 ＼&种类＼&数量
（mL/667m2）＼&施肥时间＼&种类＼&数量
（kg/667m2）＼&施肥时间＼&种类＼&数量
（kg/667m2）＼&施肥时间＼&地福来示范田＼&地福来专用肥＼&200＼&5月2日＼&46%尿素＼&15＼&5月16日＼&48%复合肥＼&20＼&5月21日＼&对照田＼&空白＼&0＼&5月2日＼&46%尿素＼&15＼&5月16日＼&48%复合肥＼&25＼&5月21日＼&]
表4 5月21日秧苗素质考察记载
[处理＼&绿叶数
（片）＼&株高
（cm）＼&根数（个）＼&分蘖数
（个）＼&总根数
（个）＼&白根数
（个）＼&白根率
（%）＼&地福来
专用肥＼&4～4.5＼&30.61＼&22.1＼&10.4＼&47.06＼&1.5＼&对照＼&4～5＼&22.31＼&17.7＼&6.8＼&38.42＼&1.1＼&]
2.5 产量结果分析 7月14日，对陈瑶湖周真信早稻示范田进行测产，从表5可以看出，地福来大田专用肥示范田比对照田667m2有效穗数多3.34万穗，平均穗粒数、结实率比对照略低，经计算得出，地福来大田专用肥陈瑶湖示范田比对照田增产31.47kg/667m2。
表5 陈瑶湖点理论产量构成与实际产量
[处理＼&667m2
穗数（万）＼&每穗粒数＼&结实率（%）＼&千粒重
（g）＼&理论产量
（kg/667m2）＼&实际产量
（kg/667m2）＼&总粒数＼&实粒数＼&地福来
专用肥＼&22.67＼&93.72＼&84.97＼&90.65＼&25＼&481.52＼&409.29＼&对照＼&19.33＼&102.5＼&91.96＼&89.72＼&25＼&444.50＼&377.82＼&]
3 项铺镇唐山圩示范点情况
3.1 示范目的 本次示范目的是在同等的施肥管理水平下，以增加产量为目的。
3.2 示范地点 项铺镇唐山圩周学斌示范田
3.3 示范方法 同一田块，共计0.667hm2，示范田0.333hm2、对照田0.333hm2。进水口为对照田，出水口为示范田。
3.4 示范情况记载 栽培方式为机插秧；品种为单季糯稻品种：太湖糯。6月24日机插秧，秧龄20d。6月25日开始下大雨，秧苗水淹3d以上，7月9日秧苗补棵结束。9月5日进入孕穗期。9月9日田间观察，分蘖数无差别。
施肥情况：（第一次）6月中旬，施基肥17%复合肥20kg/667m2。机插秧苗后7d即7月4日追施尿素7.5kg/667m2。退水后（第二次）追施12.5kg/667m2尿素。返青后（第三次）追施10kg/667m2尿素，18%复合肥15kg/667m2。7月30日，示范田施用地福来大田专用肥200mL/667m2（1瓶），对照田未施用。9月4日，追施（穗肥）BB肥12.5kg/667m2。整个生育期共施用3次叶面肥（7月22日、8月10日、9月30日）。
3.5 产量结果分析 10月6日，对唐山圩示范田进行测产，结果如表6。当时示范田内水稻正值灌浆期，所以只测667m2有效穗和每穗总粒数。结实率统一按90%计算。从苗情长势分析，预计示范田比对照田成熟期早5～6d。
表6 唐山圩点理论产量构成与实际产量
[处理＼&穗数（万/667m2）＼&每穗粒数＼&结实率（%）＼&千粒重
（g）＼&理论
产量
（kg/667m2）＼&实际
产量
（kg/667m2）＼&总粒数＼&实粒数＼&地福来
专用肥＼&19.93＼&115.7＼&104＼&90＼&27＼&542.62＼&462.2＼&对照＼&19.83＼&94.71＼&85.24＼&90＼&27＼&456.38＼&387.9＼&]
4 结论
在首都医科大学“以学生学习成长为核心”的第四轮教育教学改革中，利用学校现有的BB平台，在细胞生物学课程中引入了翻转课堂教学模式，开创性地进行了教学改革的有益尝试。
1.1教学分析
教学分析包括教学内容分析和学习者分析。细胞生物学理论知识多，比较枯燥抽象，学生学习起来觉得难理解和掌握。因此在此基础上我们对知识点进行梳理和分析，根据每个知识点制作短小视频，每个视频时间为10分钟左右，视频里除了针对各个知识点讲解的录像外，还制作了动画，如细胞培养、细胞融合、细胞转染等动画，用动画演示了整个实验过程，深受学生的欢迎。
1.2创建自主学习环境，支持学生课下学习
翻转课堂中学生获取新知识的主要渠道是课下的自主学习过程，因此有必要创建自主学习的环境，帮助学生顺利完成课下的“知识获取”。（1）教师设计制作教学视频，学生只要有智能手机接入互联网，就可以根据自己的需要，实时扫描二维码观看相关教学视频，从而随时随地利用碎片时间来学习，实现指尖上的移动学习。（2）支持学生的协作学习，学生可以利用网络交流平台与教师、同伴随时展开讨论。
1.3课前学习效果评价设计
教师以教学目标为依据设计一些题目，供学生在学习视频后完成，并运用有效的技术手段对学生的学习活动过程及结果进行测量，给予评价，以检测其对知识的掌握程度。
1.4课中实施
在翻转课堂的教学模式中，由于课前经过深度预习，学生对要学习的知识有了一定的理解和掌握，因此在课堂上教师可以实行项目引领、任务驱动措施，让每一位学生都参与到项目中，在项目进展中遇到问题时，组内协作解决或咨询教师。如在微管组装中，让学生选择微管组装所需的材料和条件，教师巡视，对有问题的小组和学生及时给予指导。这种教学模式优化了课堂结构，在学生主动建构知识的过程中将课堂上的互动引向更深层次，让学生动起来、让课堂活起来，实现了知识的应用创新。
1.5学习成果交流展示
在BB平台上，教师将课堂中观察到的问题进行梳理，将在课堂中动态性生成的资源和学生的作品收集整理后与学生分享，这些内容能被长期保存，在学生遇到问题时可随时查阅。另外，因病或参加其他活动缺席的学生可以利用这些资源来补课，学习困难的学生也可通过教师提供的资源进行补救性学习。同时，设立学习成果交流展示区，学生将自己的探究结果以及在探究过程中的心得与同班同学进行交流，实现思想的碰撞。
2研究意义
通过翻转课堂可以实现知识传授和知识内化过程的颠倒安排，使学生成为学习过程的主体，促进学生自学能力的提高，使学生自己掌控学习的进度和速度，并寻求教师的个性化指导。翻转课堂所倡导的“以信息技术带动教学结构变革和学生个性化全面发展”与新课程改革的核心理念“一切为了每一位学生发展”的要义相契合。翻转课堂的教学实践已在国内外多个地区取得极大的成功，促进了教育信息化的发展。在深化教育教学改革和全面推进教育国际化的过程中，以培养大学生终身学习能力为目标，积极探索培养高素质创新型人才的途径和方法已成为当前高等教育改革与发展的主题。首都医科大学启动了第四轮教育教学改革，其主题是“以学生学习成长为核心，以提升教育教学质量水平为目标，以内涵发展为基础，推进我校人才培养综合改革”。翻转课堂作为一种新兴的教学模式，颠覆了传统的教学过程，它将知识传递过程放在课堂外，学生借助于教师制作的教学视频和开放的网络资源自主完成知识的建构，而课堂则成为他们完成作业、探讨问题或得到个性化指导的地方。因此，在翻转课堂中，学生成为整个教与学过程中的主体，所有的知识都需要学生在自主学习和动手的过程中掌握。通过翻转课堂教学模式下细胞生物学的教学设计与应用，围绕教学改革精神，创造学生自主学习的良好氛围，提高学生的学习积极性，促进了学生自主学习能力的提升。
3需要注意的问题
通过翻转课堂的实践发现，在实施过程中要注意以下一些问题。
（1）翻转课堂的教学视频是学生学习的重要资源，教学视频的制作需要教师从视频的内容、视频的设计形式、视频的长短、视频的吸引力等方面思考，这要求教师认真研究教学内容，更要求教师具有现代信息技术知识和信息技术素养。
（2）翻转课堂需要学生在课外学习，积极参与课堂活动，学生的自觉性和学习能力是实施翻转课堂的基础。因此，针对一些学习意志力较差、学习能力不强的学生，还需要教师的引导和帮助，以培养他们的自主学习能力。
