时间：2023-06-16 16:27:23
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【关键词】 益智宁神口服液/药理学;抽动—秽语综合征/中药疗法;神经递质;疾病模型，动物;大鼠;色谱法，高压液相
抽动—秽语综合征(Tourette syndrome，TS)，又称多发性抽动症，是一种儿童期发病的慢性神经精神障碍性疾病。临床表现主要为突然、快速、反复、非节律性、不自主和刻板的运动性抽动和发声性抽动，还可能伴有各种行为紊乱、强迫观念与行为、认知障碍等，可不同程度地干扰和损害儿童的认知功能，影响社会适应能力。本病病因尚未明确，具有明显的遗传倾向，多见于4～12岁的儿童，患病率约为005%～3%，近年来发病呈明显上升趋势，男孩多于女孩[1]。广东省中医院儿科在临床实践中运用自拟方益智宁神口服液治疗该病，取得了较好的疗效[2]。本实验应用亚氨基二丙腈腹腔注射建立抽动—秽语综合征模型大鼠，观察该药对模型大鼠行为学和神经生物学的影响，现报道如下。
1材料与方法
11实验动物SPF级SD大鼠60只，28～30d龄，体质量(250±10)g，雌雄各半。由广东省医学实验动物中心提供(许可证号:粤监证字2008D006，批号：0037766)。
12实验药品亚氨基二丙腈(iminodipropionitrile，IDPN)购自Alfa Aesar公司(批号：C7323A)，中药益智宁神口服液(由广东省中医院提供，批号：080201)，对照药物为氟哌啶醇(上海信谊九福药业有限公司，批号：08031121)。
13仪器及试剂LC26A 型高效液相色谱仪、SPD26AV 荧光检测器、C2R4A 数据处理机均为日本岛津公司产品，脱水机、包埋机、切片机和生物显微镜等设备为德国Leica公司产品，微量组织匀浆器为Millipore公司产品，ZH蓝星C/s型脑立体定位仪，高氯酸、乙二胺四乙酸二钠(EDTANa2)均为分析纯，甲醇为色谱纯，对照品由中国药品生物制品所提供。
14模型复制参考Wakata[3]的方法，将亚氨基二丙腈溶解于生理盐水，稀释成浓度100mg/mL，给药途径为腹腔注射，剂量为150mg·kg-1·d-1，每天1次，共用7d。
15分组及给药选用SD大鼠随机分为4组：空白组和模型组各10只，中药组和西药组各20只，每组均雌雄各半。治疗组在造模后第2天开始给药，中药组按20kg的儿童每天口服20mL益智宁神口服液的比例计算，每只大鼠灌胃约2mL/d;西药组按20kg的儿童每天口服氟哌啶醇片1mg的比例计算，每只大鼠灌胃约015mg/d，连续14d。
16大鼠行为观察[4]采用观察评分，每次至少观察1h，主要诱发症状为运动行为和刻板运动。(1)运动行为评分：0分：安静或正常活动;1分：能过度兴奋;2分：探究行为增加;3分：跑;4分：跑和跳;(2)刻板运动(或定型运动)评分：0分：无刻板运动;1分：旋转行为;2分：头和颈部的上下运动过多;3分：头、颈部的上下运动过多加旋转行为;4分：头向侧摆合并头和颈部的上下运动过多。
17神经递质水平检测[5]第14天将所有实验大鼠迅速断头处死，借助脑立体定位仪，取右脑海马组织及边缘系统(包括纹状体、隔核、层壳核、基底节、齿状回)，精确称质量，置入1mL处理液(含01mol/L高氯酸和05g/LEDTANa2)中，微量组织匀浆器冰溶下匀浆，4℃冰冻离心10000r/min，取上清液置入-20℃保存。采用高效液相色谱法测定多巴胺(DA)和去甲肾上腺素(NE)浓度。测样时，室温下解冻，进样20μL，以峰面积外标法定量。
18统计学方法采用SPSS130和SAS913版本进行统计学处理和分析，各组神经递质水平检测数据分别进行方差齐性和正态分布检验，方差不齐采用秩和检验，检验水平α=005。
2结果
21各组行为学观察和评分各组治疗前后运动行为和刻板运动积分见表1。模型组行为学评分与空白组比较，差异有显著性意义(P
治疗14d后，中、西药组运动行为积分和刻板运动积分降低，与模型组比较差异有显著性意义(P
22各组治疗前后脑组织DA、NE含量变化比较表2结果显示：模型组脑组织DA水平降低，NE水平升高，与空白组比较差异均有显著性意义(P
3讨论
IDPN是一种中枢神经毒素，50年代以后就用于神经病理学的研究，本研究参考Wakata[3]的方法复制模型，从神经生物学和行为学两方面观察药物治疗对TS模型动物临床行为学典型特征的影响。IDPN诱发TS模型大鼠出现明显刻板运动和运动行为异常，如过度兴奋、探究行为、异常跑跳、旋转行为和头颈部上下侧摆等动作均具有TS临床行为学的典型特征，有时出现连续的嗤鼻、抬举上肢等动作，类似于人类TS患儿喉部发声、耸肩等特征行为。本研究通过对药物治疗前后TS模型大鼠运动行为和刻板运动行为评分的比较，发现中药组在改善动物TS典型特征行为方面效果明显，如头部、颈部的抽动减轻，旋转行为明显缓解，每次异常行为发作持续时间缩短，异常抽动次数消失，异常跑动及不规律的弹跳运动明显减少。
虽然目前对TS的神经生物学物质基础还未完全阐明，但基本认为中枢神经递质，特别是DA、NE、5-羟色胺(5HT)等与TS之间关系密切[5]，因此，探讨大脑多巴胺类神经递质及其代谢产物的水平是证明药物神经生物学疗效的主要依据。本研究对大脑海马区DA和NE水平进行测定，结果表明：治疗后中药组DA水平明显升高，而NE水平有所下降，均趋向于正常水平。与TS有关的神经递质包括乙酰胆碱、肾上腺素、5HT、多巴胺等，主要分布于纹状体、隔区、蓝斑、黑质等海马、基底前脑及边缘系统，构成复杂的神经网络[6-8]。有关药物治疗对大脑组织不同部位和核团神经递质水平的影响文献报道并不一致，而且与检测时间点有很大关系[8]。本研究结果初步表明，中药治疗14d后，对大脑组织DA和NE两种神经递质水平的变化产生显著影响，对于治疗过程中以及停药后神经递质的动态变化仍需进一步观察。
益智宁神口服液的主要组成为：熟地黄、黄芪、白芍、龙骨、远志、石菖蒲、五味子。其中熟地，其味甘，性微温，入心、肝、肾经，本品味厚气薄，为补血生精、滋阴补肾之要药，《珍珠囊》曰：“主补血气，滋肾水，益真阴”。黄芪，味甘，性微温，入脾、肺经，质轻升浮，为升阳补气之圣药。可补中气、益元气、温三焦、壮脾阳，选以补脾益气。白芍味苦、酸，性微寒，入肝经，既能养血敛阴，又能平抑肝阳，还能柔肝止痉;而龙骨味甘、涩，性微寒，入心、肝经，专攻平肝潜阳、镇静安神之用，两者搭配，养阴宁心，平肝潜阳。五味子性温，五味具备，酸能收敛，苦能清热，咸能滋肾，温而不燥，既能益气生津，补肾养心，用其养心滋肾安神;远志、石菖蒲有安神益智、化痰开窍之功效。诸药配伍，具有健脾滋肾、平肝熄风、宁神益智、化痰开窍之功效。氟哌啶醇是目前治疗TS的最有效药物之一[9]，疗效确切，但因副作用明显使其临床应用受到限制，通过实验结合临床用药发现，益智宁神口服液的疗效与氟哌啶醇无明显差异，且疗效更加稳定，易为患儿及家属接受。
参考文献
[1] Freeman R D， Fast D K， Burd L， et a1.An international perspective on Tourette syndrome：selected findings from 3500 inpiduals in 22 countries[J].Dev Med Child Neurol， 2000，42( 7 )：436.
[2]杨丽新.培土抑木法治疗小儿抽动秽语综合征36例[J].浙江中西医结合杂志，2001，11(9)：575.
[3] Wakata N， Araki Y， Sugimoto H， et al. IDPNinduced monoamine and hydroxyl radical changes in the rat brain[J]. Neurochemical Research， 2000， 25(3):401.
[4]刘智胜.小儿多发性抽动症[M]. 北京:人民卫生出版社， 2002：237-238.
[5]刘师莲，张兆莲，刘贤锡，等. 大鼠脑组织单胺类递质及其代谢产物的检测方法研究[J].山东大学学报：医学版，2002，40(5):472.
[6]Wong D，Brasic J，Singer H，et a1.PET imaging of dopamine and serotonin in Tourette syndrome[J]. Neuroimage，2006，31(4)：162.
[7]Swerdlow N R， Sutherland A N. Using animal models to develop therapeutics for Tourette syndrome[J]. Pharmacol Ther，2005， 108(3):281.
［关键词］ 扁平苔藓；精神因素；应激；抑郁；焦虑；神经生物学
［中图分类号］ r781.5 ［文献标识码］ a ［文章编号］ 1003- 1634（2008）01- 0056- 03
近年来，精神因素与扁平苔藓（lichen planus，lp）发病间的联系及其作用机制有了越来越多的研究，并取得了一定的进展。大量的临床病例分析发现lp 患者常伴有精神创伤史及焦虑、抑郁等情绪障碍，并且一系列的神经生物学研究不仅发现了精神因素引起的体内血管活性肠肽、热休克蛋白、皮质醇等的改变，而且阐述了可能的应激作用机制。本文对相关的神经生物学研究资料以及焦虑、抑郁和应激的神经生物学研究进展进行回顾和总结，以期进一步了解精神因素在lp 发病中的作用机制，为探索lp 预防和治疗的新手段提供启示。
1 lp 精神因素的神经生物学研究
精神因素在lp 发病中的作用机制目前尚难以阐明。可能与应激反应有关，但也不能排除患者的情绪波动加强了其他因素的致病过程[1]。目前关于这方面的神经生物学研究成果主要有以下3 点：
1.1 血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide，vip）vip 是皮肤中存在的多种神经肽之一，与许多皮肤病有关，如银屑病、异位性皮炎、白癜风等。在皮肤组织中，神经纤维多分布于真皮、真皮深层的血管、汗腺及毛囊周围[2]。许多研究者认为，lp的发病与神经精神因素有关，vip 作为重要的神经递质，与精神压力有关，当受到更多的压力时，人的唾液会分泌更多的vip[3]。有人对20 例lp 病变组织中vip 的表达进行检测，结果显示，20例皮损中有16 例标本染色阳性，弥漫分布在表皮各层的细胞质，与正常皮肤仅见于基底层有所不同。有精神创伤组阳性表达例数显著高于无精神创伤组。因此推测，lp 组织中vip 表达增高可能与精神因素有关，可能通过启动精神免疫网络参与lp 的发病[4]。vip 可能通过以下机制在lp 发病中起作用：①促进t 细胞表面的黏附分子与血管内皮细胞的相互作用，促进淋巴细胞降解胞外基质成分，实现在组织中游走，进而形成淋巴细胞浸润。②角质形成细胞表面表达vip 受体，vip 由神经释放后到达表皮，通过与vip 受体间的相互作用，诱导角质形成细胞产生细胞因子，进而通过刺激角质形成细胞内dna 合成的增加，有丝分裂的加快使角质形成细胞增殖。③促进肥大细胞脱粒，参与炎症反应[4]。
1.2 热休克蛋白（heat shock protein，hsp）hsp 又称应激蛋白，是一类分布广泛的高保守蛋白，作为重要的分子伴侣，具有重要的生理功能，与感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤等研究领域关系密切。近年的研究表明hsps 参与口腔扁平苔藓（olp）的发生，特别是hsp60 和hsp70，olp 的hsp60 阳性表达率与正常黏膜相比存在显著差异性。chaiyarit 等研究发现，hsp60 在olp 病损区以上皮层细胞强阳性表达为主，固有层浸润的淋巴细胞有弱阳性表达，血管为阴性。正常口腔黏膜hsp70 为弱阳性表达，说明正常口腔黏膜也有轻度刺激因素存在，起到了恰当的保护作用。糜烂型olp 的hsp70 下调，说明其细胞保护机制受损，缺乏必要的细胞保护作用[5]。bayramgürler 等研究发现，hsp60 在lp 皮损中的表达比在正常皮肤中高，与银屑病皮损中的表达没有显著性差异，hsp70 在lp 基底层中的表达比正常皮肤中低；在浸润的淋巴细胞中，hsp60 在lp 中的表达比在银屑病中高，而hsp70 的表达在lp 和银屑病中均比正常皮肤中低。因此认为，hsps 在lp 的发病机制中发挥重要作用[6]。hsps 参与olp 的发生可能由于hsp 的高度保守性，人体t细胞在识别、攻击外来抗原的同时将过度表达hsp60 的上皮角质形成细胞也作为靶细胞，造成上皮基底细胞的破坏[7]。
1.3 下丘脑- 垂体- 肾上腺皮质（hpa）轴的作用研究发现，伴抑郁症状的olp 患者，尤其是糜烂型olp 患者的nk 细胞水平下降[8]。ivanovski 研究发现，olp 患者具有明显的疑病、抑郁、癔症倾向，其中糜烂型olp 患者的血清皮质醇水平、cd4、cd8 水平显著升高，而cd16 水平显著下降；白纹型olp 患者的cd8 水扁平苔藓精神因素相关的神经生物学研究进展临床口腔医学杂志2008 年1 月第24 卷第1 期j clin stomatol, jan,2008,vol.24.no.1平显著升高。以上由抑郁等精神因素引起的olp 患者内分泌及免疫系统的变化被认为是通过hpa 轴的作用达成的。hpa 轴是主要的神经内分泌应激轴。hpa 轴的功能亢进可能是抑郁症的神经生物学基础。在应激过程中，血清中的类皮质激素浓度显著升高，它对单核细胞和前炎症细胞因子的生成起到负性调节作用，从而导致了免疫抑制。ivanovski 等的研究表明糜烂型olp 患者血清皮质醇水平升高，并且和临床疑病、抑郁、癔症症状密切相关，反映了hpa 轴代偿性功能亢进，以调控免疫和炎症反应。糖皮质激素的作用是有选择性的，依赖于免疫应答的阶段和类型[9]。一般认为糖皮质激素主要抑制介导细胞免疫的th1，因此实际上它起了放大介导体液免疫的th2 的作用[10]。另一方面，抑郁症与炎症反应的激活密切相关，而其中前炎症细胞因子是hpa 轴的有力的催化剂。尤其il- 6 刺激了促肾上腺皮质释放激素的生成，增强了hpa的活性，因此增加了肾上腺皮质激素和皮质醇水平。然而，在慢性应激和抑郁状态下，尽管糖皮质激素过度分泌，前炎症细胞因子的水平仍旧增长，提示此时免疫细胞上的糖皮质激素受体功能紊乱，无法对这些细胞免疫的关键组分发挥抑制作用。低敏感
性糖皮质激素受体的功能在经过有效治疗后可恢复正常。kubera研究发现抗抑郁药物，如米帕明、氟西汀等可以增加il- 10等抗炎症细胞因子的生成，显著减小ifn- γ／il- 10 比值，导致负性t 细胞免疫调节[9]。另有研究发现，olp 患者的焦虑水平和唾液中的皮质醇水平显著高于正常对照组[11]。这些资料均提示，皮质醇和情绪障碍在olp，特别是糜烂型olp 的发病机制中发挥作用。在lp 的发生、发展过程中，个体的心理状态可能影响了免疫系统的自身稳定性。
2 应激、抑郁、焦虑的神经生物学研究
各种测定受体的方法都证实，免疫细胞表面和细胞内都存在神经递质和激素受体。神经系统和内分泌系统正是通过这些受体作用于免疫细胞，而对免疫应答进行正向或负向调节[10]。由于已有的研究已证实lp 患者多伴有焦虑、抑郁等情绪障碍，认为精神因素对lp 发病的作用机制可能与应激反应有关，故对于焦虑、抑郁及应激反应时的神经生物学变化的研究可能有助于进一步探究精神因素在lp 这一自身免疫性疾病发生、发展中的神经- 内分泌- 免疫机制。
2.1 应激研究表明，在急性或慢性应激状态下，产生生理反应的核心是hpa 轴和交感神经- 肾上腺髓质轴（sas）。sas 轴主要涉及儿茶酚胺，包括去甲肾上腺素和肾上腺素的分泌。在脑内去甲肾上腺素能神经元主要分布于脑干蓝斑核内。应激反应发生时，脑内去甲肾上腺素分泌增加，外周则通过交感神经刺激肾上腺髓质分泌去甲肾上腺素和肾上腺素，其作用于靶器官，产生一系列生理反应，使机体调节和适应应激状态。在应激状态下，甲状腺、胰腺也有相应的变化[12]。
2.2 抑郁
2.2.1 神经递质抑郁症的发生可能与中枢去甲肾上腺素、5- 羟色胺、多巴胺、乙酰胆碱、γ- 氨基丁酸、神经肽能系统及其受体的功能紊乱有关。可能与抑郁症有关的神经肽有：促甲状腺激素释放激素、生长抑制激素、生长激素释放激素、催产素、神经肽y、血管升压素、阿片肽、促皮质激素释放激素、p 物质等[13]。
2.2.2 神经内分泌因素①.hpa。地塞米松抑制试验能反映hpa 功能。研究显示，近40%～50%的抑郁症患者地塞米松抑制试验脱抑制，往往随临床症状缓解而恢复正常。②.下丘脑- 垂体- 甲状腺轴（hpt）。steiner 等研究发现，大约有1／3 的抑郁症患者促甲状腺激素对促甲状腺素释放激素的反应迟钝，而小部分患者表现为反应过度[14]。③.下丘脑- 垂体- 生长激素轴（hpgh）。研究发现，抑郁症患者生长激素对α2 肾上腺素拮抗剂可乐定的分泌反应减弱。另有研究发现抑郁症患者脑脊液中生长抑素含量较正常人低。推测抑郁症患者生长抑素能低下可能与去甲肾上腺素能及5- 羟色胺能低下有关[15]。
2.2.3 免疫系统异常有证据显示抑郁症时可同时存在免疫激活（巨噬细胞活性升高，急性反应蛋白升高）和免疫抑制（自然杀伤细胞活性降低）现象。抑郁症病人存在il- 1、il- 6、tnf 增加。这3 种细胞因子均对hpa 轴有激活作[15]。
2.3 焦虑。
2.3.1 神经生化学①.乳酸学说。认为乳酸盐可能引起代谢性碱中毒、低钙血症、有氧代谢异常、β- 肾上腺素能活动亢进、外周儿茶酚胺过度释放、中枢化学感受器敏感性增高，使有焦虑倾向者产生焦虑表现。②.神经递质。中枢去甲肾上腺素能系统、多巴胺能系统、5- 羟色胺和γ- 氨基丁酸等4 种神经递质系统可能与焦虑症的发病机制有关[16]。
1摆正教学与科研的关系，认真投身教育事业
作为一位青年教师，首先要树立忠于人民教育事业的思想，摆正教学与科研的关系，克服重科研、轻教学的思想。教学与科研相辅相成，不能“选边站”，既要搞好教学又要搞好科研，只有两者形成良性循环，才能保证人才沿着正确方向发展[1]。在授课时，笔者深刻体会到学生爱听、听得懂的内容正是自己包括我科室其他同事研究的内容，所以才能讲得更亲切生动，才更能激发学生探求真理的热情。
2在老教师“传帮带”下自觉学习，提高自身教学能力
作为教育部重点实验室的年轻教师，笔者有幸得到教学和科研经验丰富的老教授的指导，受益匪浅。2012年，85岁高龄的陈宜张院士身体力行，全程为我校八年制学生讲授医学神经生物学课程。笔者作为科室教学秘书，有幸全程旁听了大师的授课。老教授翔实丰富的授课内容、谦虚谨慎的治学态度、大胆挑战前人的探索精神，是我们年轻教员学习的榜样。他用生动事例诠释了不唯上、不唯书、只唯实的探求真理的态度，以科学史为主线，结合自身，介绍了教学与科研工作中成功的经验与失败的教训。他亲自制作的所有授课幻灯片都体现出清晰简练的风格，反映了他务求实效的一贯作风，给我们留下了深刻的印象。正如古人所说：他山之石，可以攻玉。多听听其他学科优秀教员的授课，同样是提高授课水平的捷径。此外，校督导专家组在每次听课后给予的中肯建议及学生在课堂上和课后的反馈[2]都能让授课者及时了解授课中的缺陷和不足，不断提高授课水平。
3根据不同专业背景，精心安排教学内容
目前我校对临床医学、麻醉、生物技术、心理专业的学生在第二学年开设神经生物学课程。如何让学生“既吃得饱又吃得好”呢？我们的体会是根据学校新版课程标准，结合学生已有的知识背景和专业定位来选取内容。第二学年学生已有解剖、生理、生化知识的积累，而神经生物学作为交叉学科，课堂讲授的知识容易与学生已有知识重复。讲授知识过浅，容易导致“炒冷饭”，使学生滋生轻视思想；讲授过深，容易使学生滋生厌学情绪。所以要从神经科学的角度和适宜深度讲授知识。如在解剖学和生理学知识的基础上，根据需要拓展神经解剖学和神经生理学的内容。对临床和麻醉专业学生授课时，注意从临床出发去认识一些相关的疾病；对生物技术专业的学生，则注重科研思维的培养，增加新观点、新技术的介绍；对心理学专业的学生，适当增加大脑高级功能包括情感和精神类疾病的知识及研究进展的介绍。此外，对长学制小班学生，采用专题讨论形式的PBL教学，并采用撰写综述和现场答辩的考核形式，不拘泥于课堂所授内容，鼓励学生就感兴趣的内容进行深入思考。
4发挥本科生导师制的优点，开展学生第二课堂活动
近年来实行本科生导师制度，通过师生双向选择，教研室对少数有兴趣、有热情、学有余力的学生开展第二课堂活动，并安排JournalClub，从本科室研究方向出发，拓展课堂所学知识。如联系神经肽的发现和相关知识，讲解本科室开展的神经肽放射免疫实验；联系神经投射通路，讲解和演示组织化学实验和荧光成像；结合我校神经行为学开放实验室的特色，并联系认知和情感障碍相关知识，介绍和开展动物行为学实验。经过几年摸索和努力，我科室先后有多位参加第二课堂活动的学生在我校创新技能大赛中获奖。
5及时总结与改进课堂教学工作
这学期我科室采用新编教材授课，令人欣慰的是，根据全部课程结束后对学生的问卷调查来看，临床、麻醉、心理专业的大部分学生都对我科室教员的授课持赞同和肯定的态度，但同时问卷中也暴露出以下一些新的问题。（1）少数学生对于不同授课教员的教学风格较难适应，可能影响授课效果。针对这一问题，下一步可加强集体备课，协调各位教员的授课内容，做到讲透神经科学的重要知识点，不重复也不遗漏，并尽可能统一风格。（2）有的学生反映讲授内容偏深、偏重研究进展、基础知识铺垫不够的问题。下一步将对相关知识加以铺垫、补充和完善，使学生既了解神经科学领域的发展动态，又能掌握神经科学领域的基本知识、基本原理。（3）多媒体教学生动直观，信息量大，学生印象较为深刻[3]，但过多或不恰当地使用多媒体，容易混淆学生的学习重点[4]，影响学生的理性思维。下一步将对课件内容加以精练，突出重难点。
参考文献：
[1]由振东，王雪琦，曹莉，等.培养青年教师的实践与体会[J].山西医科大学学报，2008，10（2）：39-41.
[2]刘冲，沈甫明，缪朝玉，等．青年教师药理学教学体会[J]．药学教育，2010，26（3）：46-48．
[3]赵丽，罗艳琳，尹艳玲，等.医学神经生物学教学方法的选择[J].科教导刊，2013（33）：142-143.
[关键词]神经生物学；课外科研实践；七年制；综合型人才
我国中长期教育改革和发展规划纲要（2010～2020年）的战略目标之一：到2020年进入人力资源强国行列。一个国家在世界范围内的竞争力和影响力是由该国的教育实力来决定，因此培养具有创新意识和能力的综合型人才是发展国家实力，增强国际竞争力迫切需要的。医学院校是培养创新性综合型医学人才的摇篮与基地，通过特定的课外科研活动把课堂知识运用到实践中，在实践中巩固课堂知识，进一步发现问题并学习新知识，是综合型医学人才培养的重要环节，对于提高医学生的综合素质、培养其创新精神和实践能力具有不可替代的作用[1-2]。
我国传统的医科大学基础教育通常以课堂教学为主，以书本为中心，与科研实践活动完全分隔开，重视及强调课本知识，忽略对七年制医学生科研创新思维和动手能力的培养。七年制医学生基础好、起点高、学习能力强，学生在前期已经具备了一些基础课程知识和技能，具有进一步掌握本领域新技术和新进展的能力，在教师的指引与帮助下，可以涉猎更广更深层次的前沿理论与技术[3]。通过此文和同行分享本学系在引导七年制医学生参与神经生物学课外科研实践活动方面的一些方法与体会。
1全面推行导师负责制
牛津大学早在19世纪就实行了导师制，导师既要指导学生们的学习，也要指导他们的生活，其最显著的特点就是师生关系密切[4]。近几年国内绝大多数高校已经开展了导师制的教学实践活动，目的是为了培养学生的科研兴趣，指引学生高效地将书本上的理论知识应用于实践，拓宽其视野，提高其提出与解决问题的能力，最终培养学生的探索型或创新型的科学素养和能力。
导师制主要涉及以下两个方面：①首先学生根据自己的兴趣爱好来确定研究方向，进而选择在此研究范围内从业的指导老师作为导师，在确保顺利完成其现有学业的基础上，积极参与到导师团队的科研工作中；②导师可根据学生的综合条件，如性格特点、兴趣爱好、对基础知识的掌握程度及对科研工作的爱好和期待程度，为学生提供相应的参与科研的机会，充分调动学生的科研兴趣，培养其科研思路，使他们能将书本上的理论知识灵活运用到科研实践活动去中并加以拓展。经过三年的尝试，该教育方式能够在很大程度上调动学生的科研兴趣，培养学生的科研思维和科研能力，巩固并拓宽课本知识，同时为导师提供更多发现人才、选拔人才的渠道。最终通过师生的双向选择（每位导师可以与3～5位学生建立导师制关系），确认指导关系，可根据学校相关规定和要求开始课外科研实践活动，具体实施如下。
1.1查阅并阅读文献，撰写综述
学生与导师在经过多次详细讨论后，确定自己的研究方向，在导师的指导下学习并掌握各种检索工具的使用，查阅文献和相关资料。导师对检索所获得的文献进行筛选分类后，按照理论上由浅至深的顺序，或按照技术上由旧至新的顺序，指导学生阅读学习文献，做读书笔记，同时鼓励他们在组会中去讲解一些有代表性的文献，在上述过程中，导师要做到及时与学生交流和讨论。接下来导师拟定题目，由学生来撰写文献综述，此过程中需要导师和学生反复讨论、修改及补充。通过上述一系列的训练，学生不但能充分掌握本研究领域的基础理论与最新动态，还培养了深入浅出的科研写作思维和科研语言表达能力。
1.2设计并开展实验研究
学生依据各自的课题研究方向和阅读文献的结果，并根据实验原理设计出具体的科研工作计划和实验方案，再与导师反复多次讨论、修正后进一步实施。在具体实施实验研究之前，通常由导师手把手对学生进行实验室基本功培训，如如何配置各种缓冲液，如何灌流、取材，切片，染色。以借助人工神经导管修复成年大鼠坐骨神经损伤的实验为例，首先学习制作实验动物坐骨神经缺损模型，导师需要向学生演示其过程、讲解注意事项等。第二步如何将神经外膜与人工神经导管缝合在一起，导师需要向学生阐述上述操作的目的和原理，学生见习完成后，就可以进行实践操作。在具体的实施过程中，学生可以随时和导师交流实验进展情况如遇到的困难、实验失败的原因和预实验结果。导师也要及时讲评学生科研训练中的进步，及时给予学生鼓励，发现问题并能及时纠正，激发学生积极参与科研活动的热情和动力。在实验的具体实施过程中，组织学生定期开展课题进展汇报，以此锻炼他们的学术交流能力。
1.3处理数据，撰写论文
实验数据是论文结果的重要组成部分，怎样将庞大无章的原始数据，表现成为一目了然地且极具表现力的图表结果。前期医学生已经学习医学统计学这门课程，在具体科研实践过程中，需要学生将统计学课本知识应用于科研实践中去，即应用相应的数据分析和统计软件对原始实验数据进行建立数据库及处理分析，最终的结果要与导师进行讨论与校对。撰写及是检验学生整个科研活动非常关键的一环，在科研实践活动的整个过程中，导师都需注意进行讲解与引导，例如在每周组会上学生讲解文献时，文献中的前言部分除了综述该研究领域的进展情况外，还提出了“为什么”开展本研究这一科学问题。那么学生在撰写科研论文时该如何巧妙地引出自己的科研问题呢？需要师生之间在组会上针对这一问题及论文的其他内容反复讨论，直至学生逐渐掌握科研论文写作的要求。
2神经生物学课外科研实践的收益、存在的问题和解决办法
课外科研实践活动无论是对学生还是对导师而言都是获益匪浅的双赢的过程[5]。对导师而言，着眼于对学生创新意识、创新精神和创新能力的培养，让学生在实践中慢慢成长。借助科研实践这样一个平台，吸引优秀的医学生加入课题组中深造，他们朝气蓬勃且思想活跃，可为科学研究注入新鲜血液，为学科的发展储备坚实的后备力量。同时，在“传道授业解惑”的过程中要求老师在情感、态度和价值观上对学生进行激励、鼓舞，用自己的良好品质与精神气质去影响学生。试想：一个老师说话、讲课或做科研工作时毫无激情，又怎能调动学生对知识探究的激情。老师一定要做到自律且优秀，通过自身的言传身教，逐渐影响学生的独立人格，形成他们正确的价值观、世界观。“授业”的过程，要求老师有一定的知识储备，即“要给学生一碗水，师傅肚子里要有一缸水”才行，并能采用恰当的方法传授给学生，使学生能够很好的接受、吸收与利用，做到这一点，要求老师具有强烈的职业追求，要不断地完善自我。“解惑”，学生提出的疑惑，老师要有效地解决。对于基础知识或实验技巧方面的困惑，老师应采用恰当的方法调动学生的主动学习能力，引导并发掘培养学生勇于质疑的精神的同时，及时给出有效地解决方案。对他们生活中的问题，也要注意观察，必要的时候给出自己的建议，使他们很好的走出困惑。在“解惑”的同时也要意识到，虽然帮助学生是老师的天职，但帮助的最终目的是培养学生独立的人格并使他们自己掌握一定处理问题的能力，在帮助的时候要留有空隙让他们自己去探索、去发现。整个的“传道授业解惑”的科研实践过程，也是老师提升自己的过程。
对学生而言：①转变自己的学习方式，变被动为主动。在导师的引导下，学生亲自参与、主动实践，在实践中运用所学的课本知识解决各种层面的实际问题，有利于培养并提高学生的科研创新能力和实践能力。科学实践是人类认识自然并改造自然的最直接活动[6]，学生亲历科研活动是培养创新意识和能力的重要载体[7]。通过上述实践活动，学生初步掌握文献资料的检索、综述撰写、科学研究的选题和实验设计、常用实验室仪器和动物实验的基本操作方法等。过程中，学生遇到困难或遭遇失败时，通过进一步查阅文献资料、分析推理或与导师讨论后，可能产生新的思路和新的发现。整个科研实践过程中，学生充分调动其聪明才智，发挥其独立思考的能力，运用所获得的知识去解决实际的问题，学生的创新能力和动手能力大大提高。②有利于培养学生的科研兴趣。兴趣是行动的原动力[8]，在科学实践活动过程中，学生不仅会遇到枯燥的重复工作，也有可能遇到充满挑战的难题，既可以充分发挥自己聪明才智来解决遇到的问题，也可以直接从导师那里得到答案或帮助；不断地遇到问题、解决问题并提出新的科学问题，这个过程不仅能激发学生的学习兴趣及探究问题的好奇心，也可培养学生观察问题、分析问题和解决问题的能力。③有利于培养学生科研素养和综合实验技能。科学研究极具挑战性，只有好奇心是不够的，实验中通常会碰到这样那样的困难，学生必须具备足够的恒心、耐心及毅力，才能克服困难、解决问题。同时，在实验过程中还要不断学习各种实验技能，提高自己的动手操作、独立思考的能力。④有利于培养学生的团结协作精神。团结协作是科研必需的基本素质[9]，任何一项科研任务的顺利完成都必须依赖诸多人的智慧和力量，学生之间在科研实践过程中能增进彼此之间的交流，共同面对困难、承担风险、分享成绩，从而逐步形成乐于助人且与人合作的团队精神和能力。
学生能够积极参与课外科研实践活动是件好事，但在具体的实施过程中也会遇到一些问题。比如，有些学生参加课外科研实践的动机不够单纯，遇到困难容易产生畏难、胆怯情绪。这必将导致其在科学研究过程中出现一些急功近利的想法，总是考虑能否发表文章以及文章的数量，亦或这些文章对将来的毕业分配或进一步深造是否帮助等等。也有一部分学生起初对科学研究抱有极大的热情和憧憬，但是经过几次失败的探索之后便打起了退堂鼓。当出现上述问题时，导师需要及时对学生进行引导和鼓励，让学生们充分认识到在科学研究的道路上不仅仅有喜悦和成功、还充满了坎坷和苦难，任何一个伟大的发现都是在经过长期艰苦的探索之后完成的。科学研究的道路上所有的弄虚作假、急功近利都会导致严重的错误和失败，只有真心热爱且持之以恒的人才能在科学的道路上越走越远和越走越广。经验证明，积极开展导师负责制的课外科研实践活动是培养高素质复合型医学人才的重要途径之一，仍需不断积累经验，充分发挥导师的引导作用，挖掘学生潜能，调动其探究问题的积极主动性，引导学生良性发展。
经过导师负责制的课外科研实践活动，神经生物学系老师指导的学生在校内及北京市属高校间的各类比赛如学术论文、实验设计和科技发明制作中脱颖而出，纷纷获奖，这其中凝集了老师们的辛勤指导和孜孜不倦的教诲以及同学们的热情探索与求知。
[参考文献]
[1]杨萍，熊鹰，阮怀珍，等.神经生物学第二课堂在第一课堂教学中的作用和地位[J].西北医学教育，2011，19（4）：787-789.
[2]周晓红，陈晓光，彭鸿娟，等.以课外科研工作为基础拓展医学生创新综合素质教育空间的探索[J].西北医学教育，2006，14（3）：235-236.
[3]杨朝阳，李晓光.神经生物学教学模式及改进[J].中国康复理论与实践，2016，22（1）：122-124.
[4]程琼，陈罡，沈爱国，等.神经生物学教学方法与课程建设探讨[J].基础医学教育，2011，13（7）：602-605.
[5]邢俊玲，段建红，胡三觉.从神经生物学教学培养医学生创新思维探讨[J].基础医学教育，2011，13（3）：223-224.
[6]刘浩，庞丹.杜威的科学技术“探究”思想解析[J].东北大学学报（社会科学版），2016，18（1）：18-22.
[7]尹艳玲，韩松，李俊发，等.医学神经生物学分层次教学的探索与实践[J].基础医学教育，2015，17（8）：681-682.
关键词：卒中后抑郁；动物实验研究；综述
卒中后抑郁（post stroke depression，PSD）是脑卒中后的最常见的并发症之一，是脑卒中患者最常见的心理障碍，其患病率可高达20%～60%。卒中后抑郁可严重损害脑卒中患者的认知功能，影响患者的预后情况，增加患者痴呆及自杀的风险，给患者的家庭及社会带来沉重的压力。现将近10年关于卒中后抑郁的动物实验研究进展综述如下。
1 卒中后抑郁的发病机制
PSD的发病机制复杂，涉及神经生物学、解剖学和社会学、心理学等诸多因素。在20世纪80年代，Robinson等就提出，脑内参与情感调节的5-HT能神经元和NE能胞于脑干，其轴突通过丘脑和基底节到达额叶皮质，脑卒中病变累及上述部位可影响5-HT能神经元和NE能神经元及其通路，导致两种递质水平降低而引起抑郁。Moller等利用正电子发射型计算机断层显像（PET）间接估计了5-HT受体活性，研究发现在急性卒中后5-HT神经递质出现代谢的异常，尤其在边缘系统和中缝核5-HT代谢的显著下降，可能与抑郁的发生相关。临床上使用5-轻色胺再摄取抑制剂可缓解PSD的症状，进一步支持PSD与单胺类神经递质下降有关的观点。Terroni等根据MRI研究结果显示病灶影响边缘-皮质-纹状体-苍白球-丘脑神经环，尤其是前额叶腹侧和背侧扣带回皮层、海马、杏仁核等易产生PSD，且以左侧为著，而这种情况未见于脑桥背部和小脑。说明前额叶背外侧皮质环路在情绪 的调节中起着重要作用，脑内该区域白质纤维连接的改变可能也会影响情绪调节过程。这与控制情感的神经环路主要分布在额颞叶、边缘系统和脑干腹部及其皮层下联系纤维的研究结果相一致。有学者认为，脑卒中"突如其来"的发生和其严重程度，使患者的工作和日常生活能力改变甚至丧失，导致患者心理应激障碍、心理平衡失调，由此对抑郁症的产生有一定的作用。
2 卒中后抑郁动物模型的建立
有关卒中后抑郁的动物模型的建立，近年来国内文献报道多为复合模型即在卒中基础上结合相应应激刺激构建PSD模型。裘涛等[1]采用双侧颈总动脉永久性结扎后予以行为限制制作PSD大鼠模型，观察大鼠自发改变，海马区单胺类神经递质的变化。结果显示：模型组大鼠水平运动得分、垂直运动得分、清洁动作次数与假手术组比较显著下降（P
3 针刺干预PSD大鼠的实验研究
卒中后抑郁患者不仅有精神障碍症状而且还存在肢体的活动障碍，采用体针治疗卒中后抑郁可以显著促进患者肢体的恢复，平衡患者脏腑的阴阳，调节患者气血的虚实。龚燕等[13]采用单侧颈总动脉不全结扎联合孤养和小剂量利血平皮下注射制备复合型PSD大鼠模型。观察各组大鼠的行为学变化；利用荧光分光光度法测定各组大鼠大脑海马区NE和5-HT含量。结果显示，与正常组相比，模型组大鼠糖水消耗量和脑内NE、DA含量均明显下降。电针能使PSD大鼠糖水消耗量和脑神经递质NE、DA含量明显增加。得到的结论是：电针治疗PSD大鼠的机制可能与提高其海马区5-HT和NE含量有关。孙培养等[14]选择通督调神针法干预卒中后抑郁大鼠。结果：造模完成时，模型组和针刺组蔗糖水饮用量、水平及垂直运动得分、血浆中单胺类神经递质的含量均较正常组降低，Zea Langa神经行为学评分提高，差异均具有统计学意义（P
4 中医药物干预PSD大鼠的实验研究
中医认为卒中后抑郁属于"中风"与"郁证"范畴，由于受到躯体病残的困扰，最终情绪抑郁。裘涛等[1]采用双侧颈总动脉永久性结扎后予以行为限制制作PSD大鼠模型，随机分为模型组、涤痰开窍解郁组、氟西汀组，并设假手术组，采用RP-HPLC-荧光检测法测定大鼠海马区单胺类神经递质的变化，并观察大鼠自发改变。结果发现模型组大鼠行为能力下降（P
5 西医药物干预PSD大鼠的实验研究
PSD的西医药物治疗包括原发病、并发症和抑郁症的治疗。患者因需同时服用治疗脑卒中、高血压或其他并发症的药物，故在选择药物时，应选择相互作用小的药物，所以新型抗抑郁剂有一定优势，更适于神经系统疾病所致继发性抑郁的治疗。赵立波等采用CUMS结合孤养建立抑郁模型，MCAO术建立卒中模型PSD模型组和氟西汀组大鼠先建立卒中模型后建立抑郁模型，腹腔注射相应药物进行干预，连续给药21d后，用酶联免疫法和免疫组化SABC法检测给药后各组大鼠脑组织中5-HT，NE，NGF的表达。结果显示与假手术组比较，抑郁模型组和PSD模型组大鼠脑组织中5-HT，NE，NGF表达均明显降低（P
6 研究存在的问题及展望
综上所述，国内外学者在论述PSD发病的因素时各有侧重，具体的发病机制尚未明确。现在多数学者认为其发病是由多种原因通过多种机制所致，与心身疾病的生物-心理-社会医学模式相一致，可能是神经生物学因素和社会心理因素共同作用的结果。
目前，关于PSD的研究大多建立在动物实验的基础上，制备的动物模型主要以缺血性卒中为主，但卒中的发病类型包括出血性卒中和缺血性卒中，关于出血性卒中后抑郁动物模型的制备相对较少，这方面的研究信息相对缺失。并且，一般情况下卒中后抑郁患者多合并高血压病、血脂异常等基础病，而这些在动物模型身上无法一一体现；同时，在动物实验造模、治疗、取材的过程中，都有可能出现一些轻微的误差，如取材的不完整性等。这些都有可能导致实验结果存在一定的误差，以至于影响实验的准确性。
其次，关于卒中后抑郁治疗方法颇多，有针灸、中医药物、西医药物等。脑卒中后抑郁属于"中风"与"郁证"范畴，运用中医药物治疗时，应综合分析患者实际病情，并概括患者分型，从而辩证论治。针灸疗法治疗卒中后抑郁一方面可以帮助患者残肢的功能恢复，间接有利于患者抑郁状态的改变，另一方面疏肝行气、调和阴阳，又起到直接改善患者情绪的作用。西医药物治疗PSD的治疗原则是早期、单一药物、综合、个体化、长期系统用药。目前运用较为广泛的是：三环类抗抑郁药、5-HT再摄取抑制剂、NE再摄取抑制剂等，但西医药物的使用存在一定的副作用。
因此，寻求PSD的发病机制以及制备理想的PSD模型，寻找治疗PSD有效的方法是目前亟待解决的问题，相信随着分子生物学、神经生物学等基础学科的发展和西医学技术的不断介入，卒中后抑郁的发病机制研究正从多层次、多角度不断深入。假以时日，肯定能提出卒中后抑郁的最佳治疗方案。
参考文献：
[1]裘涛，陈眉，代建峰，等.脑卒中后抑郁症动物模型的建立与评价[J].中国行为医学科学，2006，15（1）：12-13.
[2]刘福友，杨石，陈卫垠，等.脑卒中后抑郁大鼠模型的建立[J].中国临床康复，2006，10（42）：91-94.
关键词：儿童孤独症；发病因素
1943 年Leo kanner 首次报道了11名自闭症儿童，其主要表现是交流障碍、语言障碍、和刻板行为，又称kanner三联征[1]。在随后的半个世纪以来，儿童自闭症作为广泛性发展障碍（Pervasive Development Disorder ，简称PDD） 的典型代表，受到了世界范围的普遍关注和重视[2]。儿童孤独症是起病于婴幼儿时期的一种严重的广泛性发育障碍。特征为社会交往障碍、语言交流障碍和兴趣范围狭窄、重复或刻板动作为主要临床表现的一组行为综合征[3]。是一种严重的、广泛的社会影响和沟通技能损害。孤独症起病于婴幼儿时期，症状通常在患儿12～18个月时就有表现[4]，但确诊却要在患儿24～36个月时才能做出，有个别的患者甚至到成人时才被诊断患有自闭症[5]。
本症多见于男孩，男女发病比例为4：1。根据全世界的统计，孤独症的发病率大约为万分之五。近年来，各方面报道提示该病的发病率有上升的趋势。该病起病早，病因复杂，症状特殊，目前该病尚无特效治疗方法，但行为、营养、药物、脐血单个核细胞移植[6]等等治疗取得了较好的疗效。
1 病因
儿童孤独症的病因目前尚无定论，可能是生物学因素与环境非生物学因素相互作用的结果。前者包括遗传、神经生物学、免疫、围产期异常等因素。后者包括生化、饮食等因素。
1.1 生物学因素
1.1.1 遗传因素 家系研究证实该病有家族聚集性.孤独症父母本身即为精神障碍的易患人群[7]。男性患者明显多于女性。男；女约4：1。孤独症同卵双生共患率在60%～92%范围；异卵双生共患率0%～10%；同胞再患概率3%～5%，较之普通人群高25～60倍，说明孤独症与遗传因素密切相关。迄今为止的研究发现，孤独症的发病与130多个基因相关，且分布于lO多条染色体[3]。
1.1.2 神经生物学因素 生物学研究手段主要是基因研究。归纳有关孤独症众多相关基因，主要在五个方面显示出异常。较突出的是，突触功能基因及突触形成相关的基因，以及与突触相关的一些细胞黏附分子基因。其中相当部分与精神分裂症、双项情感障碍涉及的基因相同，提示这几种疾病可能是一种与突触发育、功能异常有关的一类疾病。有学者甚至对这几种疾病的传统界定提出了质疑，认为这些疾病不过是基于同一发病通路上的几个不同层面。生物分子层面的分型将可能是一个新的趋势。研究还提示，孤独症还和发育过程中神经元迁移异常、神经细胞内信号转导异常、神经递质紊乱以及神经细胞离子转运异常相关。这几方面的分子机制还相互交叉，相互作用和影响来致病，即这些易感基因之间的关系并不是孤立的，而是错综复杂的，是多个微效基因共同作用导致的病变。
1.1.3 免疫学因素 有人指出慢性病毒感染学说，认为免疫缺失的个体，在胎儿或新生儿期增加病毒感染的几率，易感染病毒引起中枢神经系统的损害，导致婴儿孤独症。
1.1.4 围产期异常因素 本症患儿较多有围生期脑损害史、脑电图异常、神经系统软体征以及癫痫发作等。近年来的研究发现，本症患儿较多见脑室左颞角扩大.提示患儿有颞叶内侧结构的病变，磁共振影像检查还可见部分患儿脑蚓部发育不全，故认为本症可能与中枢神经系统异常所致的功能障碍有关。
1.2 非生物学因素
1.2.1 生化因素 有人发现孤独症患者可能与金属代谢有关，有的患儿严重缺锌，血浆内内啡呔水平与刻板运动有关。
1，2.2 饮食因素 科学家研究发现，儿童孤独症的发生和发展过程还与患儿过量食用酸性食物密切相关。正常情况下.幼儿的血液呈弱碱性，幼儿如过多食用酸性食品（高糖、高脂肪和动物性蛋白食物等），其血液就会随之酸化，使其机体内环境平衡发生紊乱.呈现酸性体质，并会渐进性地出现一系列症状--手足发凉，易感冒，免疫力降低，常哭闹不止，皮肤易过敏和出湿疹，严重者则可因机体缺乏钾、钙、镁、锌等元素而影响大脑的发育及功能，导致记忆力和思维能力减退，甚至思维紊乱，以致产生轻微的精神异常表现。
1.2.3 环境因素 有人认为孤独症患儿的成长环境中缺乏丰富和适当的刺激，没有被教以社会行为，是该病发病的重要因素。长期处在单调环境中的儿童，会用重复动作来进行自我刺激，对外界环境就不感兴趣。
2 诊断标准
依据美国婴幼儿自闭症诊断标准DSM-IV诊断。该标准根据自闭症的3大主要临床表现分为3项，其中社会交往项至少有2条，语言交流和行为活动、兴趣项至少各1条，相加后大于或等于6项者即可确诊。
3 治疗方法
随着研究的不断深入，目前提倡对孤独症应及早综合干预，以教育训练和行为矫正为主，辅助药物治疗，且这种治疗须持续终生[8～10]。
当前常用的治疗方法有：药物治疗、行为治疗、教育训练、行为干预
感觉统合训练、音乐疗法、游戏治疗、脐血单个核细胞移植治疗、耳穴贴压配合头针治疗、醒神开窍头针疗法、高压氧治疗、综合干预等。
由于父母对婴儿心理行为发育知识缺乏，使孤独症患儿不易早期发现，延误早诊断，早治疗。其实对自闭症患儿来讲，2～3岁的早期干预对预后影响十分显著。但治疗不及时，则会导致终生残疾连自理能力都没有。因此，如果怀疑存在自闭症或其他发育问题的儿童，主动出击是制胜的重要法宝，家长应积极寻求早期治疗干预。且儿童自闭症是一种慢性的终生疾病，它的症状不会随年龄增长而消失，康复治疗是一个漫长的过程，家长和医护人员要有爱心、耐心和信心，接受有效的综合治疗和教育训练是完全可以改善预后的，千万不可轻易中途放弃治疗。
参考文献：
[1] 静进，小儿心理与心理行为疾病[M].广州：广东科技出版社，2005，428-439.
[2] 刘晓明，孤独症儿童治疗方法概况[J].北京教育学院学报（ 自然科学版），2007.4（2）：15-18.
[3]康颖，静进.孤独症的病因分子机制与遗传生物学研究进展[J].中华行为医学与脑科学杂志，2010，19（10）：953-955.
[4]Mitchell S， Brian J， Zwaigenbaum L，et al.Early language and communication development of infants later diagnosed with autism spectrum disorder[J].J Dev Behav Pediatr，2007，27：S69-78.
[5] Filipek PA， Accardo PJ， Baranek GT， et al.The screening and diagnosis of autistic spectrum disorders[J].J Autism Dev Disord，2009，29：439-484.
[6]Liu M，Sun LW，Lü YT，et al.[J].Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu.2010，14（32）：5967-5970.
刘敏，孙良伟，吕涌涛，等.干细胞治疗自闭症：安全性和有效性观察[J].中国组织工程研究与临床康复，2010，14（32）：5967-5970.
[7]Szatmari P，MacLean JE，Jones MB，et a1.The familial ag- greffation of the lesser variant in biological and nonbiol-ogieal relatives of PDD probands：a family history study[J].J Child Psychol Psychiatry，2008，41：579-586.
[8] Gillian Parkinson；Neil Humpnrey.Intervention for ch-ildren with languageimpair ments：a model of evidence-based outcome research[J].Journal of Research in Special Educational Needs，2008，8（1）：2-12.
关键词：光遗传；抑郁症；抑郁小鼠模型
中图分类号：F24文献标识码：Adoi：10.19311/j.cnki.1672-3198.2019.19.041
抑郁症是一种会严重危害人类身心健康的精神疾病，是当今社会中很常见的一种情绪障碍综合征。抑郁症患者会呈现出焦虑，自卑，厌世，心境低落等症状，重者甚至产生自杀倾向。随着社会压力的不断增大和现代生活节奏的加快，抑郁症发病率也呈现快速上升的趋势。据统计，约13%-20%的人曾有过抑郁的体验，人群中的抑郁症终生患病率更高达6.1%-9.5%之多。抑郁症已然成为世界常见的疾病之一，研究降低其发病率的科学方法成为了迫在眉睫的事情。抑郁症的生物学机制以及治疗手段都需要进一步的科学突破，近年来光遗传学的快速发展，为我们提供了研究神经生物学机制的强有力工具。本研究利用光遗传学技术设计实验来研究与抑郁症发病相关的脑区，从而为抑郁症发病机制理解及治疗提供更好的帮助。
1抑郁症
作为一种严重的精神疾病，科学界提出几种抑郁症的发病机制假说，包括几点：
（1）神经环路假说：该假说认为抑郁症是由多个脑区参与的，综合调控发生的。负责情感，决断，赏罚的脑区对抑郁症的关系尤为密切。
（2）单胺类神经递质功能低下假说：多巴胺，去甲肾上腺素和五羟色胺等单胺类物质参与了精神活动，情绪反应，体温调节等生理反应。该假说认为患者脑内的单胺递质水平，即5-羟色胺，多巴胺和去甲肾上腺素神经递质系统功能的低下导致了抑郁症。
（3）神经营养缺乏假说：在神经发育过程中的生长因子对成年大脑的可塑性起着重要的作用。其中作为中枢神经系统中分布最广泛，含量最多的脑源性神经营养因子对神经元的生长，分化和损伤修复功能起重要作用。
类似于舍曲林，帕罗西汀和氟西汀的药物进行的药物治疗和其他形式的治疗手段是目前常见的抑郁症治疗方法，虽然这些治疗方法的见效较快，但是由于抑郁症具有高复发性和隐匿性，患者服用的不少药物都有不良副作用。
2光遗传学技术
光遗传学，是将光敏感离子通道蛋白神经元表达，并利用特定波长的光照激发从而实现对目标对象精细调控的学科，即通过操纵神经元来兴奋或抑制靶细胞和靶器官。该技术可以对哺乳动物大脑组织进行无损伤的操控，它具有目的性强、精准度高，细胞特异性强等特点。是由2005年Boyden等人证明光刺激绿藻视蛋白可以使神经元产生应答而发现的技术。近年来，光遗传学在复杂的生物学机制探究，尤其是脑科学等领域的研究中得到了广泛的应用。2011年，NatureMethods将光遗传学技术誉为了21世纪神经生物学中最具影响力的技术。
光敏感蛋白在光遗传研究中发挥着重要的作用，它是光遗传学的主要工具，被发现于单细胞微生物如绿藻、单胞菌的视蛋白中。光敏感蛋白根据不同的效应可以分为兴奋性光敏感蛋白和抑制性光敏感蛋白两种。视紫红质-2（ChR2）是目前最常用的兴奋性光敏感蛋白，它在被蓝光激活后，阳离子内流使细胞去极化，产生动作电位，提高兴奋性。视紫红质（NpHR）是一种常见的抑制性光敏感蛋白，在被黄光激活后会使细胞膜超极化，从而抑制细胞的兴奋。
光遗传学技术自问世来，广泛应用于动物行为研究，比如用光遗传学技术使果蝇体内的多巴胺大量释放，在斑马鱼的躯体感觉神经元的实验过程中，也发现光照可以使其产生逃避的游泳活动等。在神经生物学领域尤其是精神类疾病等研究中的应用也非常广泛，可以用于研究焦虑，药物成瘾，恐惧和抑郁症等领域。利用光遗傳学技术，有研究发现中脑腹侧被盖区（VTA）的神经元可以让小鼠表现出糖水偏好减少和社交逃避等特征；光遗传学刺激内侧前额叶（mPFC）可以让“易感”小鼠产生抗抑郁的作用等结论，大量研究表明光遗传学技术在抑郁症研究中可以发挥重要的作用。
3光遗传学探究抑郁症发病实验设计
3.1脑区选择
（1）前额叶皮质：前额叶皮质（PFC）是指覆盖大脑额叶前部表面的皮层结构。在社会认知的领域中，PFC对情绪认知，社会推理，心理和决策推断等问题产生了重要影响。现代研究表明，前额叶皮质功能的异常与抑郁症相关。
（2）中脑腹侧被盖区（VTA）：中脑腹侧被盖区产生的多巴胺可能参与了抑郁症的发生。对多巴胺能神经元进行特异性的激活或者抑制，可以较为明显的影响实验动物的抑郁表现。
（3）伏隔核：伏隔核参与了奖赏环路的组成，伏隔核的损伤与缺失行为的发生和发展有着必然关系。科学家们认为慢性应激是会导致抑郁症发病的最主要的因素之一，会最终引起奖赏系统GABA能神经元受损。
（4）杏仁核：杏仁核与内分泌调节和自主神经活动的调节有着非常密切的关系，因为杏仁核有可能是机体的情绪整合中枢，可以将感觉信息投射到皮层、下丘脑和脑干诸核团，形成意识水平的情绪反应。
3.2前期准备
选择同批次相同重量的同龄成年小鼠共100只小鼠，其中对照组20只小鼠，实验组80只小鼠。实验组共分为16组，四种脑区，每种脑区又分别注射兴奋性光敏感蛋白ChR2和抑制性光敏感蛋白NpHR，同一脑区注射相同的光敏感蛋白的小鼠又分为两组进行不同方式抑郁症小鼠建模。对照组注射携带GFP的病毒载体。各组小鼠在相应脑区注射相应视蛋白后，按脑区分类将光纤分别埋入DP，MO，VTA，PFC四种脑区注射上方附近，术后对小鼠进行单笼饲养，约3到4周后开始进行行为学试验。3.3建立抑郁癥研究的模型
（1）糖水偏好模型。将各组小鼠放在一系列的温和应激之下，使其受到不可预知的刺激。这些刺激包括使小鼠挨饿，不定时泼洒冰水，束缚小鼠等等。在经过三周的温和刺激之后，观察小鼠对糖水的偏好性并同对照组对比，小鼠对于糖水的偏好明显降低，并同时出现攻击力降低，毛色变差等现象。判断为小鼠的缺乏，成功建立抑郁症基础模型。
（2）公鼠造模。经过筛选，选择进攻能力较强的大鼠（大白），和进攻能力很弱的小鼠（小黑）进行实验。将小黑作为入侵鼠放在大白的笼子中，并让他们进行身体接触，每天15分钟左右。在每天其余时间内将大白和小黑用带小孔的透明隔板隔开，让小黑可以看到闻到大白，从而对小黑造成心理阴影。十五天后，将大白盒小黑共同放入社会交互实验箱中进行社会交互实验，试验箱中分为了角落区和交互区。分别在交互区有大白和无大白的情况下，观察小黑在角落区和交互区停留的时间多少，成功建立抑郁症基础模型。
3.4利用光遗传学技术操纵兴奋或抑制小鼠的脑区
分别用公鼠造模和糖水偏好两种基础模型得到的抑郁小鼠进行光遗传学操作实验。已注射光敏感蛋白的实验小鼠，可以在适合光刺激情况下兴奋（ChR2）或抑制（NpHR）该脑区的神经元，从而实现对该4个脑区的调控，探究相应脑区的兴奋或抑制对抑郁症小鼠模型行为的影响。
将不同的抑郁症建模方式得到的小鼠，选择固定频率对相应脑区进行光刺激一段时间，对于“公鼠造模模型实验组”，统计实验小鼠在角落区和交互区停留的时间比例，对于“糖水偏好实验组”，观察统计实验小鼠对糖水的喜好程度，根据光刺激前后小鼠行为变化来推断抑郁症发病相关的脑区。
4总结与展望
