时间：2023-06-15 17:17:47
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【摘要】
目的建立骨康口服液中有效成分的含量测定方法。方法采用HPLC法测定骨康口服液中有效成分含量。结果补骨脂素和异补骨脂素两种成分均达到良好分离，在测定范围内线性良好，回收率均在99%～101%之间。结论所建立的定量方法简便可行、重复性好，可作为骨康口服液的质量监控。
【关键词】 骨康口服液 补骨脂素 异补骨脂素 高效液相色谱法
Abstract:ObjectiveTo establish a method of HPLC for determining psoralen and isopsoralen in Gukang Oral Liquid. MethodsThe effective components in Gukang Oral Liquid were determined by HPLC. ResultsThe resolution and the linearity were fine with the rate of recovery of psoralen 99.96%，RSD＝1.16%; the recovery rate of isopsoralen was 100.09%，RSD=0.60%.ConclusionThe quantitative method for determining the ingredients of Gukang Oral Liquid is simple， feasible and repeatable， and can be used for quality control of Gukang Oral Liquid.
Key words:Gukang Oral Liquid; Psoralen; Isopsoralen; HPLC
骨康口服液由补骨脂、羊藿、肉苁蓉、白芍、黄芪等10味药材组成，具有补肾壮骨，活血通络，健脾益气的功效， 临床上主要用于治疗妇女更年期引起的骨质疏松症。骨康口服液复方共煎，有利于补骨脂素与异补骨脂素的煎出［1，2］，故采用水提醇沉工艺制备［3］。鉴于补骨脂素、异补骨脂素可相互转化［4，2］，原标准采用TLCS法测定补骨脂素、异补骨脂素两者的总量［5］。但TLCS法变异大，故选用HPLC法同时测定骨康口服液中补骨脂素与异补骨脂素的含量。现将研究结果报道如下：
1 仪器与试药
DIONEX SUMMIT高效液相色谱仪（PDA-100检测器、STH585柱温箱、P680 HPLC泵、ASI-100自动进样器），Chromeleon色谱工作站；补骨脂素（供含量测定用，110739-200309）、异补骨脂素(供含量测定用，110738-200410)，均由中国药品生物制品检定所提供；骨康口服液（批号：20061009，20061012，20061015），由广州中医药大学新药开发研究中心提供；乙腈为色谱纯（Merck，1192230）其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Phenomenex luna C18柱(250 mm×4.60 mm，5 μm)；流动相：以乙腈为流动相A，以0.1%冰醋酸为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长：246 nm；流速：1.0 ml·min-1；柱温：25℃；进样量：10 μl；理论塔板数均不低于3 000。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备
精密称取补骨脂素、异补骨脂素对照品适量，分别置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，以此作为对照品贮备液。精密吸取上述各对照品贮备液适量，加甲醇制成每毫升含补骨脂素35 μg，异补骨脂素44 μg的混合溶液，摇匀即得。
2.2.2 供试品溶液的制备
取本品10支，混匀，精密吸取药液10 ml，加乙醚提取4次，10 ml/次，分取乙醚层，60℃挥干乙醚， 用甲醇溶解残渣，并转移至5 ml容量瓶中，用甲醇加至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备
取处方中除补骨脂外的其余成分制成缺补骨脂阴性对照品，按“2.2.2”项下的供试品制备方法处理得缺补骨脂阴性对照液。
2.3 线性关系考察
精密吸取对照品溶液2，4，6，8，10，14μl进行色谱测定，按上述色谱条件测定峰面积，并以峰面积（Y）对进样量（X）进行回归，补骨脂素在70～490 ng范围内呈良好线性关系，异补骨脂素在88～616ng范围内呈良好线性关系，回归方程分别为：补骨脂素：Y=8224.5X-48.132 6， r=0.999 9；异补骨脂素：Y=7 371.7X-52.475 2， r=0.999 9。
2.4 精密度实验
精密吸取上述补骨脂素和异补骨脂素对照品溶液10 μl连续进样5次，测得峰面积积分平均值补骨脂素为3 211.929，RSD为0.07%；异补骨脂素为3 676.707，RSD为0.16%，表明分析方法精密度良好。
2.5 重复性实验
按照拟定的含量测定方法，对同一批样品（批号：20061009）制备供试品溶液，平行操作6份，结果测得补骨脂素平均含量为0.075 mg·g-1，RSD为2.39%；异补骨脂素平均含量为0.072 mg·g-1，RSD为2.54%，表明本测定方法具有较好的重复性。
2.6 稳定性实验
精密吸取同一供试品溶液10 μl，在0，2，4，8，12 h分别进样，记录峰面积并计算RSD，结果：补骨脂素平均峰面积为1 330.393，RSD为0.46%；异补骨脂素平均峰面积为1 056.411，RSD为1.6%，表明样品中补骨脂素和异补骨脂素在12 h内稳定。
2.7 专属性实验
取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液，按本色谱条件各进样10 μl。结果见图1。结果显示，在本色谱条件下，阴性对照无干扰。
2.8 加样回收率实验
精密吸取已知含量的同一批样品（20061009）10 ml，分别精密加入一定量的补骨脂素对照品和异补骨脂素对照品，按供试品溶液制备方法制备并测定，按公式回收率（P）(%)=(测得量-加入量)/样品量×100%计算回收率。结果见表2。表明本方法具有良好的回收率。表1 骨康口服液中补骨脂素、异补骨脂素的HPLC测定梯度洗脱条件（略）表2 加样回收率实验结果（略）表3 样品中补骨脂素、异补骨脂素含量测定结果（略）
2.9 样品测定
取骨康口服液3批，照上述方法处理后测定，记录峰面积，代入回归方程计算样品中补骨脂素和异补骨脂素的含量。结果见表3。
3 讨论
3.1 提取溶媒的选择
本品处方由多味中药组成，且由水煎煮浓缩制得，活性成分多，极性强，影响鉴别的干扰因素较多。笔者曾用水直接稀释样品进样分析，结果杂质峰较多，分离效果差。考虑到补骨脂素与异补骨脂素为呋喃香豆素类成分，因此采用乙醚提取。实验结果表明，该法可使样品中的补骨脂素与异补骨脂素提取完全。
3.2 流动相的选择
目前《中国药典》2005年版和文献报道中HPLC法测定补骨脂素与异补骨脂素大多采用甲醇-水体系［6～9］，但经过实验发现，这些体系均不适用于该制剂的分析，本文选用乙腈-0.1%醋酸溶液梯度洗脱，可以同时测定补骨脂素与异补骨脂素的含量，且获得较好的分离效果，且峰形更佳。本法操作简便，精密度高，重现性好，是控制骨康口服液内在质量的有效方法。
【参考文献】
［1］苏子仁，刘庆思，徐必达，等. 方药配伍对温补肾阳方君药补骨脂素、异补骨脂素煎出的影响［J］.中国实验方剂学杂志，1996，2(5):8.
［2］苏子仁，徐必达，刘庆思，等. 磷脂对骨康方补骨脂素、异补骨脂素煎出增溶作用探讨［J］.中国实验方剂学杂志，1997，3(3):5 .
［3］吴雪茹，苏子仁，施佳平，等. 骨康口服液工艺优化研究［J］.中成药，1999，21(5)：218.
［4］苏子仁，徐必达，刘庆思. 补骨脂素、异补骨脂素在骨康提取精制过程中化学转化的研究［J］.中国实验方剂学杂志，1997，3(6) ：1.
［5］曾惠芳， 苏子仁， 刘庆思. 骨康口服液中补骨脂素，异补骨脂素的含量测定［J］.中药新药与临床药理 ，1999，10(4)：237.
［6］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：129，229，577.
［7］陆 蓓，吴韶铭.HPLC法测定益肾灵颗粒中补骨脂素和异补骨脂素的含量［J］.中国药品标准，2002，3(4):23.
摘要：目的：建立补肾酒中补骨脂素与异补骨脂素的含量测定方法。方法：采用高效液相法，选用Zorbax SB－C18分析柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为甲醇－0.01%磷酸(40∶60)；检测波长246 nm；柱温40℃。结果：补骨脂素在0.046 9～0.233 1 μg范围内线性良好，r＝0.999 9；异补骨脂素均在0.046 6～0.232 8 μg范围内有较好的线性关系，r＝0.999 9；补骨脂素加样回收率平均为98.44%，RSD为1.19%(n＝5)；异补骨脂素平均回收率为99.70%，RSD为1.99%。结论：该法简便，快速，可用于补肾酒的质量控制。
关键词：补骨脂素； 异补骨脂素； 补肾酒； 高效液相色谱法
Determination of Psoralen and Isopsoralen in Bushen Wine by High Performance Liquid Chromatography
Abstract:Objective:To establish a method for the determination of psoralen and isopsoralen in Bushen Wine by high performance liquid chromatography (HPLC). Methods:The Zorbax SB－C18 was used as the stationary phase. The mobile phase consisted of methanol－0.01% phosphatic acid (40∶60) and detective wave was 246 nm.Results:The calibration curves of psoralen and isopsoralen were linear respectively at the range of 0.046 6～0.232 8 μg(r＝0.999 9)， 0.046 6～0.232 8 μg(r＝0.999 9).Conclusion:This method is reliable and accurate， the method can be applied to separate and determine the Bushen Wine.
Key words:Psoralen； Isopsoralen; Bushen Wine; HPLC
补肾酒为新研制的内服纯中药制剂，由补骨脂，黄芪等二十几味中药组成，主要用于肾虚气亏引起的性功能障碍。补骨脂是处方中君药，其有效组分补骨脂素，异补骨脂素为主要有效组分，在质量标准的研究制订中，采用高效液相色谱法测定补肾酒中补骨脂的有效成分补骨脂素和异补骨脂素的含量，结果表明实验的重现性好，准确度高，为补肾酒的质量控制提供了可靠的方法。
1 仪器与试剂
仪器 HP1050高效液相色谱仪。
试剂 甲醇色谱纯；磷酸 优级纯；对照品:补骨脂素；批号0739－9907，异补骨脂素；批号0738－9907；供含量测定用，由中国药品生物制品检定所提供。
2 方法与结果
2.1 色谱分析条件色谱柱：Zorbax SBC18(250 mm×4.60 mm，5 μm)；流动相甲醇0.01%磷酸(40∶60)；柱温为40℃；检测波长246 nm；流速1.0 ml/min。
2.2 供试品溶液的制备精密量取装量项下的本品10 ml，浓缩至约4 ml，加水10 ml，混匀，用乙醚振摇提取4次(20，15，15，15 ml)，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇适量使溶解，并定量转移至10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，通过已处理好的中性氧化铝柱(100～200目，2 g，内径1.0 cm)上，收集药液，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得。
2.3 对照品溶液的制备精密称取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加甲醇溶解，制成每毫升中含补骨脂素、异补骨脂素各10 μg的溶液，即得。
2.4 空白实验按处方中药味的比例，自配不含补骨脂的群药，按其工艺制成空白制剂，再按供试品溶液制备方法制备并测定，结果空白溶液与补骨脂素与异补骨脂素对照相同保留时间处未显色谱峰，认为无干扰(见图1)。
2.5 线性关系考察分别精密量取补骨脂素对照品的甲醇溶液(0.117 1 mg/ml)、异补骨脂素对照品的甲醇溶液(0.116 4 mg/ml)各1，2，3，4，5 ml，分别置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以补骨脂素、异补骨脂素对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明补骨脂素在0.046 9～0.233 1 μg范围内线性良好，其回归方程为Y＝74 768.04X100.40，r＝0.999 9，异补骨脂素在0.046 6～0.232 8 μg范围内线性良好，其回归方程为Y＝74 939.86X＋243.40，r＝0.999 9。
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2.6 样品溶液的稳定性实验精密量取同一供试品溶液(批号040106)，进样10 μl，分别于配制后0，2，4，8，17，26 h，依法测定，结果表明，在26 h内基本稳定，补骨脂素RSD为1.16%，异补骨脂素RSD为1.70%。
a对照品 b样品 c色谱图
1.补骨脂素 2.异补骨脂素
图1 色谱图（略）
2.7 精密度实验精密量取同一供试品溶液(批号040106)，进样10 μl，重复进样5次，求得相对标准偏差RSD为0.42%，异补骨脂素相对标准偏差RSD为0.39%。
2.8 重复性实验按正文方法，对同一批号(批号为040106)样品5份进行测定，求得补骨脂素平均含量0.013 6 mg/ml，相对标准偏差RSD为1.98%；异补骨脂素平均含量0.014 1 mg/ml，相对标准偏差RSD为1.63%。
2.9 回收率实验采用加样回收法，精密量取已知含量的同一批号样品(批号040106，含量补骨脂素为0.013 6 mg/ml，异补骨脂素为0.014 1 mg/ml)5 ml，精密加入补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，按正文供试品溶液的制备方法制备及上述色谱条件测定，结果见表1～3。
表1 补骨脂素回收率（略）
表2 补骨脂素回收率（略）
2.10 样品测定按正文方法，测定十批样品，结果见下表。
表3 样品中补骨脂素与异补骨脂素含量测定结果（略）
3 讨论
3.1 流动相的确定曾采用甲醇水(80∶20)，(70∶30)，(60∶40)，补骨脂素与异补骨脂素峰为一个峰，无法分离，采用甲醇－水(40∶60)，可将二峰分离，但有拖尾现象，加入少量磷酸，以甲醇0.01%磷酸(40∶60)为流动相，分离效果好，且无拖尾现象。
3.2 本实验采用HPLC法测定补肾酒中补骨脂素与异补骨脂素的含量，其提取方法简单，分析快速，精密度高，重现性好，且空白无干扰。
参考文献
［1］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：411411.
【摘要】 目的建立一种测定温胃舒片中补骨脂素和异补骨脂素含量的反相高效液相法。方法采用Kromasil C18柱，以甲醇水(55∶45)为流动相，紫外检测波长246 nm，流速1 ml·min-1。结果在所使用的色谱条件下，补骨脂素和异补骨脂素出峰位置未见干扰，补骨脂素和异补骨脂素分别在5.06～30.36 μg·ml-1和5.02～30.12 μg·ml-1浓度范围内线性关系良好(r=0.999 9)。温胃舒片中补骨脂素和异补骨脂素的平均加样回收率分别为97.64%和99.42%，相对标准偏差分别为1.16% (n=6)和0.86% (n=6)。结论该法可信度高，操作简便，重现性好，可用于温胃舒片生产上的质量控制。
【关键词】 温胃舒片； 补骨脂素； 异补骨脂素； 反相高效液相法； 定量分析
Determination of the Contents of Psoralen and Isopsoralen Contained in Wenweishu Tablet by RPHPLC
Abstract:ObjectiveTo establish a RPHPLC method for determination of the contents of Psoralen and Isopsoralen contained in Wenweishu Tablet. MethodsThe analysis was carried out by using a Kromasil C18 analytical column with methanol-water (55∶45， v/v) as mobile phase. The UV detection wavelength was 246 nm and the flow rate was 1 ml·min-1.ResultsUnder the chromatographic conditions used， there were no interferences found in the positions of Psoralen peak and Isopsoralen peak. Psoralen and Isopsoralen had fine linear responses (r=0.999 9) in the concentration ranges of 5.06～30.36 μg·ml-1 and 5.02～30.12μg·ml-1 respectively， the average recoveries of Psoralen and Isopsoralen in Wenweishu Tablet were 97.64% with the relative standard deviation of 1.16% (n=6) and 99.42% with the relative standard deviation of 0.86% (n=6) respectively. ConclusionThe method employed in this analysis is reliable and convenient with good repetition and can be used for quality control in the production of Wenweishu tablet.
Key wordsWenweishu Tablet； Psoralen； Isopsoralen； RP-HPLC； Quantitative Analysis
Wenweishu Tablet is a pure formulated preparation of traditional Chinese medicine made of twelve crude herbal materials Radix Codonopsis， Radix Aconiti Lateralis Preparata， Radix Astragali Preparata， Cortex Cinnamomi， Rhizoma Dioscoreae， Herba Cistanches， Rhizoma Atractylodis Macrocephalae， Fructus Crataegi， Fructus Mume， Fructus Amomi， Pericarpium Citri Reticulatae and Fructus Psoraleae by the method of boiling with water， concentration， dry granulation， tabletting and coating. Wenweishu Tablet has the following functions: strengthening healthy "qi"， warming and nourishing stomach，promoting "qi" circulation to relieve pain. It can mainly be used to treat patients and symptoms for chronic atrophic gastritis and gastric abscess， abdominal distension， belching， anorexia， chilly， acratia etc. caused by chronic gastritis in clinical application. Psoralen and Isopsoralen are the major active constituents of Fructus Psoraleae and also the main effective contents in Wenweishu Tablet. The Pharmacopoeia of China requires the total content of Psoralen and Isopsoralen in Fructus Psoraleae to be no less than 0.7%［1］. Psoralen and Isopsoralen are furocoumarin compounds and have been reported to have anti-tumor activity against BGC823 cancer cell by Morphological and MTT assays in vitro［2］. The chemical structures of Psoralen and Isopsoralen are shown in Figure 1.
For determination of the contents of Psoralen and Isopsoralen， the major analytical methods reported in the literatures are UV-spectrophotometry， TLCScanning， GC， CGC， SFECGC and HPLC［3～8］. Since HPLC has the advantage of convenient and good repetition， thus in the study of quality control of Wenweishu Tablet， we choose the indexes of Psoralen and Isopsoralen as quality control criteria and establish a RP-HPLC method for determining the contents of Psoralen and Isopsoralen in Wenweishu Tablet. The analytical results are satisfying and will provide a quantitative evaluation for quality control in the production of Wenweishu Tablet.
Fig 1 The chemical structures of Psoralen (A) and Isopsoralen (B)（略）
1 Apparatus and chemicals
Chromatographic analysis was performed on a 2690 Separations Module high performance liquid chromatograph (Waters， USA) equipped with a 996 Photodiode Array detector and connected to a Millennium 32 data processing system. A Model BP211D electronic balance (Sartorius， Germany) was used for weighing samples.
Psoralen (Batch number: 110709200310) and Isopsoralen (Batch number: 110738200309) were supplied from National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products (Beijing， P.R. China) and their purities were 99.37% and 99.36% respectively by the identification from RP-HPLC. Wenweishu Tablet (Batch number: 050323， 050324， 050325， 050326， 050329， 050330， 050331， 050406， 050407， 050408) was supplied from Zhejiang Yixin Pharmaceutical Co.， Ltd. The reagent used for the preparation and for the RP-HPLC analysis was of chromatographic grade (methanol). The water used for the preparation and for the RP-HPLC analysis was freshly deionized and redistilled.
2 Experimental methods and results
2.1 Chromatographic conditions and systematic compatibility testSeparations were obtained on a Kromasil C18 analytical column（250 mm×4.6 mm，φ5 μm）(Dalian chemical and physical Institute of China Academy of Science， P.R. China) with methanolwater (55∶45， v/v) as mobile phase. The UV detection wavelength was 246 nm and the flow rate was 1 ml·min-1. The column temperature was 30℃ and injection volume was 10μl. Under the chromatographic conditions used， the number of theoretical plates calculated on the peak of Psoralen was 4341 and there was a complete baseline separation among Psoralen， Isopsoralen and other components with a good degree of resolution (Rs = 2.26).
2.2 The preparation of standard solution， sample solution and blank solution
2.2.1 The preparation of standard solution The suitable amounts of Psoralen and Isopsoralen were accurately weighed and dispersed together in methanol， mixed， a 20 μg per milliliter mixing standard solution was obtained.
2.2.2 The preparation of sample solution About 1 g of the sample (comminuted powder) was accurately weighed and dispersed in 20ml of methanol， extracted ultrasonically for 30min. After cooling， methanol was added to this mixture till the total volume 25ml， mixed， the filtrate was obtained as a sample solution by filtration.
2.2.3 The preparation of blank solutionAccording to the proportion of prescription， other crude herbal materials in the prescription were weighed in the suitable amounts except Fructus Psoraleae. Using preparation technology of Wenweishu Tablet and preparation method of sample solution， a blank solution was obtained.
2.3 Interference test of blank solution10μl of standard solution， sample solution and blank solution were injected respectively into the RP-HPLC column under the chromatographic conditions described above. The results (Figure 2) showed that there were the same peaks of Psoralen and Isopsoralen appeared in the same retention times between standard solution and sample solution， whereas there were no peaks of Psoralen and Isopsoralen appeared in these retention times in blank solution， thus there were no interferences for the determination of the contents of Psoralen and Isopsoralen in sample solution.
(A) chromatogram of the standard solution
(B) chromatogram of the sample solution (C) chromatogram of the blank solution
Fig 2 Typical chromatograms for the determination of the contents of Psoralen and Isopsoralen（略）
2.4 Determination of the contents of Psoralen and Isopsoralen in Wenweishu Tablet
2.4.1 Calibration curve and linear rangeAbout 5.06mg of Psoralen and 5.02 mg of Isopsoralen were accurately weighed and dispersed together in 100ml of methanol， mixed， a 50.60μg per milliliter and 50.20 μg per milliliter mixing standard stock solution was obtained. Then 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 ml of this mixing standard stock solution were taken respectively in six 10ml volumetric flasks， diluted with methanol to a constant-volume of 10 ml， mixed， a series of standard solutions were obtained. Under the chromatographic conditions described above， 10μl of each standard solution was taken for measuring and the chromatograms were recorded. After regression analysis of linearity， the calibration curves were described by regression equations A1=7126 2C1-3828 (r=0.999 9， for Psoralen) and A2=71 840C2-17 823 (r=0.999 9， for Isopsoralen)， where A1 and A2 were the peak areas of Psoralen and Isopsoralen (as longitudinal coordinate)， C1 and C2 were the concentrations of Psoralen and Isopsoralen (as horizontal coordinate)， and r was the correlation coefficient. The results showed that the peak area of Psoralen (Isopsoralen) and the concentration of psoralen (Isopsoralen) had fine linear responses in the concentration range of 5.06～30.36 μg·ml-1 (5.02～30.12 μg·ml-1).
2.4.2 Chromatographic test of precision10μl of a same concentration of Psoralen and Isopsoralen mixing standard solution was taken to continuously analyze for six times， the RSD of peak area of Psoralen (Isopsoralen) was 0.27% (0.62%). The results showed that the chromatographic method was quite precise.
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2.4.3 Chromatographic test of stabilityAccording to the method for the determination of the contents of Psoralen and Isopsoralen， a sample of the same batch number was accurately weighed and the sample solution was prepared， and 10 μl of this solution was measured in 0， 2， 4， 6， 8， 10， 12 h within a day， the RSD of peak area of Psoralen (Isopsoralen) was 0.33% (0.49%). The results showed that the sample solution was stable within 12 h.
2.4.4 Chromatographic test of reproducibilitySix of 1g of sample (comminuted powder， Batch number: 050407) were accurately weighed， and the contents of Psoralen and Isopsoralen were determined after treated like the method of determination of the contents of samples， the average content of Psoralen (Isopsoralen) was 0.166 mg·tablet-1 (0.319 mg·tablet-1)， and the RSD was 1.39% (1.67%). The results showed that the chromatographic method had a good reproducibility.
2.4.5 Recovery of the chromatographic methodSix of 0.5g of samples (comminuted powder， Batch number: 050407) were accurately weighed and put into six of 25ml volumetric flasks respectively. Then two of 4， 5， 6 ml of the mixing standard stock solution of Psoralen (30.40 μg per milliliter) and Isopsoralen (63.60 μg per milliliter) and two of 16， 15， 14 ml of methanol were added respectively， extracted ultrasonically for 30 min. After cooling， these mixtures were diluted with methanol to a constant-volume of 25ml， mixed， the filtrates were obtained by filtration， 10μl of each filtrate was taken for measuring and the recovery was calculated， the average recovery of Psoralen (Isopsoralen) was 97.64% (99.42%) and the RSD was 1.16% (0.86%) (n=6). The results were shown in Table 1 and Table 2.
Tab 1 Recovery test of Psoralen（略）
Tab 2 Recovery test of Isopsoralen （略）
2.4.6 Determination of the contents of samplesThree of 1g of samples (comminuted powder， Batch number: 050323， 050324， 050325， 050326， 050329， 050330， 050331， 050406， 050407， 050408) were accurately weighed， and treated like the item “2.2.2”， thirty of sample solutions were obtained. 10μl of each sample solution was taken for measuring and the contents of Psoralen and Isopsoralen were calculated based on each calibration curve. The results were shown in Table 3.
Tab 3 Result of sample analysis （略）
3 Discussion
3.1 Selection of detection wavelengthThe UV spectrum showed that Psoralen and Isopsoralen had obvious absorbent peaks at the wavelength 244 nm and 245 nm respectively after UV-scanning via a 996 Photodiode Array detector， thus 246 nm was selected as detection wavelength.
3.2 Selection of the methods of sample pre-treatmentThe experiments investigated three kinds of extraction methods - ultrasonic extraction， refluxing extraction and Soxhlet's extraction. The results showed that the sample solution treated by ultrasonic extraction had minimum impurities that disturbed the determination of the contents of Psoralen and Isopsoralen， and the effect of extraction was the best. On further investigation to the time of ultrasonic extraction， we found that Psoralen and Isopsoralen could be extracted at the maximum after the sample being extracted ultrasonically for 30 min. In addition， the experiments compared the effect of different extraction solvents (methanol， ethanol， chloroform， mobile phase and redistilled water) and different number of extractions on the results， which revealed that methanol as extraction solvent would give better separation effect and Psoralen and Isopsoralen would be extracted completely from the sample only one time.
3.3 Comparison of the methods of the content determinationWenweishu tablet is a product derived from Wenweishu capsule with dosage form changed. The criterion for content determination of Wenweishu capsule is not sufficient since only TLC-scanning is used to determine the content of Psoralen in the course of quality control (WS3-B-2629-97). However， in the study of quality control of Wenweishu Tablet， we chose indexes of Psoralen and Isopsoralen as quality control criteria and adopted RP-HPLC method for determining both contents at the same time. After examination of methodology， the established method satisfies the requirements of content determination and is convenient， and the results are reliable with good repetition.
参考文献
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［3］ LIANG Shengwang， LIU Wei， “Quantitative Analysis of Traditional Chinese Medicine Preparations”， First Edition ［M］. Press of Traditional Chinese Medicine of China， Beijing， 1997：272.
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关键词 白癜风颗粒 补骨脂素 异补骨脂素 高效液相色谱法
白癜风是一种皮肤色素脱失、呈现白色斑的皮肤病。据统计，我国约有3000万的白癜风患者。中医理论认为，白癜风虽长在外表，根却在脏腑。系因于情志不舒、气血不和、脉络阻滞不通、毛孔闭塞、肌肤失养所致。
白癜风的病因:主要是脏腑失和,肝郁失疏,血热、外受风温、湿热之邪停留在肌肤,导致气血失调,血不营养肌肤和七情内伤,风邪搏于肌表,日久湿热内蕴,阻遏气血津液在人体正常分布流通,促使肝肾不足,肌肤失养,毛窍因子闭塞死亡,气滞则形成白癜风。其病因与遗传,免疫功能异常,内分泌代谢功能紊乱,黑色素细胞自身破坏,氨酸、铜离子缺乏,精神紧张,微循环障碍,神经调节功能异常,外伤,化学物质、烈日曝晒等有密切联系。
中药白癜风颗粒临床上治疗白癜风的效果比较好。白癜风颗粒由补骨脂、黄芪、红花、当归、川芎等15味中药组成。具有益气行滞、活血解毒、利湿消斑，驱风止痒之功效，在本院皮肤科应用多年，证实对白癜风等疾病有效。为了控制白癜风颗粒的质量，保证临床用药效果，本实验建立了HPLC测定白癜风颗粒中补骨脂素和异补骨脂素的方法。经方法学考察证实该方法特异性高，回收率和精密度好，结果满意。
仪器与试剂
Waters 600高效液相色谱仪；Waters[LL] 2487紫外、可见波长检测器；Breeze色谱工作站；十万分之一微量分析天平；补骨脂素对照品(110730-200309)和异补骨脂素对照品(0738-200108)购自中国药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯，白癜风颗粒由本院自制。
方法与结果
色谱条件1～2：色谱柱,ReliaSil．C18(4．6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇,水(47：53)；流速,1.0ml/min；检测波长,245nm；柱温室温，进样量μl。对照品溶液的制备：精密称取补骨脂素对照品10．42mg，异补骨脂素10．92mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取1．5ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备：取本品粉末约0．5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
阴性对照品溶液的制备：按处方制备取不含补骨脂药材的样品颗粒剂，按供试品溶液的制备方法制成相应的阴性样品溶液。线性关系考察：精密吸取补骨脂素与异补骨脂素混合对照品溶液2、4、6、8、10μl分别注入液相色谱仪，测定补骨脂素与异补骨脂素色谱峰面积。以补骨脂素与异补骨脂素的进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：y=1．25×103+7．55×106x，r=0．9997。
结果表明，补骨脂素在0．031264~15630 μg具有良好的线性关系，异补骨脂素在0．03276~0．16380 μg具有良好的线性关系。
精密度实验：精密吸取同一供试品溶液(批号：050502)5μL，重复进样6次，分别计算补骨脂素和异补骨脂素的质量分数，结果其RSD分别为0．76％和1．29％。
稳定性试验：精密吸取对照品溶液5μL，分别于0、2、4、24、36小时测定峰面积，计算得补骨脂素和异补骨脂素峰面积的RSD分别为1．99％和1．62％，表明对照品补骨脂素和异补骨脂素在36小时稳定。
重现性实验：取样品，精密称定5份，制备供试品溶液，进样测定计算补骨脂素和异补骨脂素的质量分数，其RSD为0．59％。
回收率实验：采用加样回收法。取批号为050501的样品5份，每份0．25g，置具塞锥形瓶中，各精密加入补骨脂素和异补骨脂素混合对照品0．14mg，制备供试品溶液，进样，测定。结果补骨脂素和异补骨脂素平均加样回收率为99．04％，RSD为1．50％。
样品测定：取3批白癜风颗粒制备供试品溶液。精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μL，进样，测定，结果见表1。根据结果，暂定本品以干燥品计，含补骨脂素和异补骨脂素总含量不得少于0．22mg／g。
讨 论
流动相的确定：本实验曾选择乙醇-水溶液系统，结果不太理想，补骨脂素和异补骨脂素的出峰区间有干扰，峰形欠佳。而采用本实验的色谱条件即甲醇-水系统，补骨脂素和异补骨脂素的峰形得到明显的改善，且干扰减少 。
参考文献
【关键词】 补骨脂酊 补骨脂素 补骨脂素 反相高效液相色谱法
Abstract:Objective An RP-HPLC method was established for determination of psoralen and isopsoralen in Buguzhi tincture.Methods The XTerra RP18 (4.6 mm×250 mm，5 μm) was used. The mobile phase consisted of acetonitrile-water (0.28∶0.52). The detection wave length was 247 nm.Results The retention time of psoralen and isopsoralen angelicin was 14.326 min and 15.259 min respectively. The calibration range of psoralen was 0.88～14.08 mg·L-1. (r=0.9998) and that of isopsoralen was 0.80～12.80 mg·L-1（r=0.9999）; the average recovery was 99.5％（RSD=1.10％） and 100.4％（RSD=0.59％） respectively.Conclusion The method， being simple， rapid and accurate， can be used to examine the quality of Buguzhi tincture.
Key words: Buguzhi tincture； psoralen； isopsoralen； RP-HPLC
补骨脂酊是中药补骨脂通过提取制成的酊剂，其含有补骨脂素(psoralen)、异补骨脂素(isopsoralen)等有效成分，有镇静、解痉、抗癌和光敏等作用［1］。其有效成分能在黑色素细胞中浓集，在紫外线的作用下，能增加酪氨酸酶的活性，从而增加色素的生物合成能力，用于治疗白癜风［2］。补骨脂的有效成分测定方法有双波长薄层扫描法［3］、高效液相色谱法［4-5］等。补骨脂酊是我院使用多年的中药制剂，仅有定性鉴别，而无定量测定方法。本实验建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定其有效成分，方法简便，结果较满意，可作为补骨脂酊的质量控制。
1 仪器和试药
1.1 仪器 美国Waters高效液相色谱仪（包括1525二元高压梯度泵、717自动进样器、2487双波长检测器）；BP 618型电子分析天平（德国）；KS-80D型超声清洗机（宁波海曙科生超声设备有限公司）；XW-80A旋涡混合器（上海医科大学仪器厂）；pHS-3C型精密pH计（上海雷磁仪器厂）。
1.2 试药 补骨脂素中药化学对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110739－200511）；异补骨脂素中药化学对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110738－200309）；补骨脂酊为本院制备，甲醇、乙腈为色谱纯。
2 方法和结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Waters XTerra RP18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为乙腈－水（0.28∶0.52），流速为0.8 ml·min-1；，检测波长为247 nm；灵敏度为2.000AUFS；柱温为35℃；进样量10 μl。理论板数按补骨脂素峰计算应不低于14000，补骨脂素和异补骨脂素的分离度R大于1.8。
2.2 对照品溶液的制备 分别精密称取对照品补骨脂素和异补骨脂素约20 mg ，各置50 ml容量瓶中， 加入甲醇溶解并定容至50 ml，涡旋2 min，即得每1 ml中含补骨脂素0.44 mg和异补骨脂素0.40 mg的储备液，各吸取适量储备液混合稀释。
2.3 供试品溶液的制备 精密量取补骨脂酊1 ml，置50 ml容量瓶中， 加乙腈至刻度， 摇匀，作为供试品溶液。同法制备不含补骨脂素和异补骨脂素的空白样品溶液。 转贴于
2.4 HPLC方法专属性 分别取对照品溶液、供试品溶液、空白样品溶液适量进样。对照品溶液和供试品溶液中补骨脂素和异补骨脂素组分完全分离， 分离度R大于1.8，保留时间分别为14.326 min和15.259 min，无杂峰干扰测定。空白样品溶液在补骨脂素和异补骨脂素色谱位置处无吸收峰。见图1。
2.5 标准曲线的绘制 分别精密吸取0.44 g·L-1补骨脂素和0.40 g·L-1异补骨脂素的对照品溶液20 μl、40 μl、80 μl、160 μl、320 μl，放入同一10 ml容量瓶中，用乙腈分别稀释至刻度，取10 μl进样，以浓度（C）对应峰面积（A）进行线性回归。补骨脂素和异补骨脂素的回归方程如下。
补骨脂素：A1=－15426+102653C1，r＝0.9998，n＝5。
异补骨脂：A2=－6963+98991C2， r＝0.9999，n＝5。
结果表明：补骨脂素浓度在0.88～14.08 mg·L-1范围内，异补骨脂素浓度在0.80～12.80 mg·L-1范围内线性关系良好。图1 高效液相色谱图
峰1.补骨脂素；峰2.异补骨脂素
2.6 精密度实验 分别精密吸取补骨脂素和异补骨脂素的对照品溶液适量， 放入同一容量瓶并用乙腈稀释至刻度，按“2.1色谱条件”重复进样5次， 根据测定结果计算，浓度3.52 mg·L-1和14.08 mg·L-1补骨脂素的RSD分别为0.68％和0.46％；浓度3.20 mg·L-1和12.8 mg·L-1异补骨脂素的RSD分别为0.58％和0.41％。
2.7 稳定性实验 取同一对照品溶液，按“2.1色谱条件”进样，分别于0、1、2、4、8、12、24 h各时点进行测定，结果补骨脂素的RSD为1.37％，异补骨脂素的RSD为1.14％，表明样品溶液在24 h内基本稳定。
2.8 加样回收率实验 精密吸取已知含量（批号：080124）的样品适量，分别加入不同量的对照品溶液， 用乙腈稀释至刻度，每个浓度稀释2份进行测定，按“2.1色谱条件”操作，计算补骨脂素和异补骨脂素的回收率， 结果见表1。表1 补骨脂素和异补骨脂素的回收率
2.9 样品测定 精密吸取供试品溶液各0.1 ml， 用乙腈稀释至5 ml，按照“2.1色谱条件”各进10 μl，以峰面积带入回归方程计算样品的含量，结果见表2。 表2 样品中补骨脂素和异补骨脂素的含量
3 讨 论
诉讼就是人民法院和有关当事人为解决案件所进行的全部活动。策略，即对策与谋略。诉讼策略是指诉讼当事人在整个诉讼活动中或与诉讼活动相关的活动中的对策与谋略。凡诉讼中的各种对策与谋略都可称之为诉讼策略，如起诉、应诉、辩论、执行活动中的一些正确决策、方法、技巧等。
诉讼策略的正确与否直接关系到商业银行合法权益的保护。良好的诉讼策略能够顺利的实现诉讼目的，甚至能够使案件“起死回生”，“转败为胜”，最大限度地减少经济损失。制定、实施诉讼策略的根本目的在于更好的实现诉讼目标，依法维护自身的合法权益。总之，诉讼策略与案件的关系十分密切。银行经济诉讼案件标的额大，对银行的经营效益有着直接的影响，因此，商业银行更应重视法律纠纷诉讼案件的诉讼策略，以实现最佳诉讼效果。
二、商业银行制定法律纠纷诉讼策略的程序
商业银行制定诉讼策略必须持慎重的态度，不可敷衍塞责，图一时轻松，而导致全盘皆输。制定诉讼策略既简单又复杂，既要研究案情，在依据事实和法律的基础上做出是非判断，又要为维护当事人或自身的合法权益献计献策。就制定诉讼策略的工作方式而言，它可以用个别调查、个别走访、查阅卷宗、召开专题研讨会或集体讨论等方式进行。对于工作方式选择可以因案而异，总的原则是有利于维护商业银行的合法权益进行诉讼策略制定。
诉讼策略具有一定的程序。现代谋略运筹更具程序化。在办案过程中，对一些较为简单的案件，谋略并非必须严格地依程序经历所有阶段。但是，在重大、复杂、疑难的案件谋略中，这些阶段必不可少，且要依据一定的程序，才能形成高明的谋略。商业银行制定诉讼策略的程序大致可分以下几个步骤：
1.分析案情，确定诉讼目标
制定策略是为案件处理服务的，熟悉案件是制定策略的前提条件。作为商业银行的法律顾问，制定或参与制定诉讼策略，首先要全面地把握案情。对法律纠纷的起因、关键问题及现状应准确地掌握，对于法院已经立案的应诉案件要通过阅卷和调查来了解案件的来龙去脉，查明纠纷产生的时间、地点、范围、程度和性质，掌握涉及案件的全部证据，并对涉案的证据进行认真的审核和记录，从证据来源、证据内容、取证程序等方面评断其价值，为制定策略提供必须的基础和依据，做到“兵来将挡，水来土淹”，能攻能守。对于准备起诉的案件，要认真分析案情发展趋势，分析被告可能采取的措施，分析随着案情发展可能出现的不利因素，分析案情发展的最终结果等（有无胜诉可能、能否保障实质性权利的实现），把握案件中当事人的双方矛盾的焦点或可能产生的主要分歧。通过把握案件，制定诉讼策略，打有把握之仗，做到“诉之能战，战之能胜，胜之能得，百诉百胜”。
制定诉讼策略的实质是就一个具体、复杂的案件进行决策的过程。正确的对案件进行决策，其前提就是要对案件的问题进行分析。案件的问题无外乎产生在主观方面、客观方面及主、客观之间的联系及实践方面。分析案情在确定诉讼目标过程中占据首要的地位，如果缺乏对案情透彻而中肯的分析，所确定的诉讼目标及诉讼策略就不可能正确。分析案情，就是要在深入调查研究的基础上，对具体案件中存在的问题进行具体的分析，抓住案件的实质，明确诉讼目的，确定诉讼目标，对具体案件进行定性和定量分析；就是要分析各方诉讼当事人的利弊，分析各方诉讼当事人所举之证据，分析各方当事人的主要观点，分析随着案件发展可能出现的问题，分析案件结局以及案件结局对其他案件和金融工作的影响等等。通过纵向分析，可以由表及里、由浅入深，找到根本性原因；通过横向分析，从问题发生的多种原因中，找到问题发生的最根本的、最主要的原因。只有在发现问题发生的根本原因和主要原因后，才可找到解决案件的突破口。
通过对案情的详尽分析，才可以客观、合理、正确的确定诉讼策略目标。诉讼谋略目标是人员为了解决问题，希望达到的案件处理结果。诉讼策略目标，是方案设计的方向，是判断策略方案优劣的标准。目标的准确与否，直接关系到诉讼活动的成败。诉讼策略目标的制订，必须达到下列检验准则：
（1）目标要有的放矢，具有针对性。针对案件中实际存在的问题，切中案件的疑点和要害。
（2）目标要具体。具有衡量目标是否实现的具体的操作内容，能够量化的目标尽可能明确数量界限，如索赔额、损失数等。对于较抽象的目标，采用目标分解的办法，把抽象的总目标转化为便于数量化的子目标。具体的目标还必须有实现的确切期限和有关约束条件。
（3）目标要系统。有的案件问题比较复杂，存在多个目标，这就要求人员从系统性原理出发，着眼整体，全面考虑多个目标的主次、先后等相互关系，确定最高目标与最低目标，建立起层次分明的目标体系。
（4）目标要切实可行。谋略是否可行，取决于实现目标所需要的条件。谋略目标必须建立在现实案件的基础上，而不能凭空设想，依主观愿望行事。
（5）目标要符合规范。谋略目标必须符合国家的法律和党的政策，符合社会主义道德规范，不以损害他人合法权益为代价。这是目标的规范性所要求的。
2.深思熟虑，拟定方案
在诉讼策略目标确定之后，就要解决如何达到目标的问题，即寻求达到诉讼目标的最佳手段和途径。据此，人员谋略活动进入第二阶段——深思熟虑，拟定方案的阶段。
（1）诉讼目标分析：有了目标，心中才能有全局。通过对诉讼目标进行全面、深入的分析来考虑诉讼策略，例如明确必须完成诉讼的主要目标，尽可能完成的第二目标，期望完成的第三目标等。对这些目标，还可进行定性和定量衡量，看在现有条件下能否实现，完成某一具体诉讼目标需要的时间，这样使目标能够确定得科学、合理、实际。
（2）制定对策方案：在客观、全面分析案情、分析诉讼目标的基础上，对每一过程、每一事实、每一证据上存在的问题提出具体、可能的解决方法、方式；对于涉及案件处理的关键问题则需要提出多种不同的方案，以备选用。拟定的方案必须具有两性：一是齐全性。即把所有可能做到的方案全部拟定出来，以免漏掉最佳方案。这是保证选择最好方案的重要条件。二是排斥性。即拟定出来的方案之间具有原则性的差异并且互相排斥。所谓互相排斥，就是执行了甲方案不能同时执行乙方案。
简单的案件，可以直接设计几个备选的谋略。而较为复杂的案件，往往难以直接形成提供选择的几个方案。通常可以分两步走：第一步是轮廓设想；第二是细部设计。轮廓设想阶段，人员要从不同的角度、不同的途径，提出各种各样可以适用的谋略。这时候提出的各种谋略方案，可能仅仅是一种思路，而不必过多地考虑细节。因为过多考虑细节，倒会束缚人员的思路。充分发挥创新精神，开阔多种思路，是这一阶段的主要特点。
轮廓设想时产生的谋略方案，只有经过进一步精心设计之后，才能加以选择取舍。轮廓设想时可能会产生大量的谋略方案，需要先行初步筛选，淘汰掉一些不可行的方案，而留下几个比较理想的谋略方案作细致设计。如果说，轮廓设想阶段需要的是大胆的创新和丰富的想象，那么，细致设计阶段需要的则是实事求是的精神、冷静的分析和严密的论证。细致设计主要包括以下两方面的工作：一是确定谋略方案的细节，充实方案的具体内容，使得每一方案具体细致可行；二是估计谋略方案执行的结果。通过预测，估计案件各种条件的变化可能，预计出各种条件下谋略方案的结果。既要充分估计谋略方案实施给当事人、委托人带来的效益或利益，又要估计其可能产生的风险和副作用。
3.分析评估，选择方案
分析评估、选择方案，是诉讼策略运筹的关键步骤。对方案进行准确的评估和选择，将制定的策略方案参照类似“决策树”方式进行优化，在优化方案中选择符合案情实际、切实可行、行之有效的对策方案，并在选择过程中对诉讼方案中潜在的问题做进一步分析，制定应变措施，以保证达到诉讼目标。涉及到效益或损失数据还可以用数学模型进行分析、比较，选出最佳对策方案。
分析评估、选择方案，一是要有合理的评选标准，二是要有科学的评选方法。
评选诉讼策略方案的标准，首先要看其是否能够实现诉讼策略目标。这是衡量方案优劣的第一条标准，也是最主要的标准，因为诉讼策略的目标就是为了更好地处理案件，维护银行的合法权益。所以能够实现诉讼策略目标的方案，应看作是最佳的谋略方案；其次，在同样实现诉讼策略目标的前提下评选谋略方案时，还应考虑到以下几个因素：实施的诉讼策略所付出的代价相对比较小；所承担的风险相对比较小；所产生的副作用相对比较少。
虽然上述几点是所有方案的共同标准，带有普遍性，可以作为评选的依据，但是在实施诉讼策略方案的过程中，由于受到案件人或案件本身主客观条件的限制，很难简单地确定哪个案件是最优的。有的诉讼策略方案，可能会最大限度地达到处理目标，但是代价大、风险大，有的诉讼策略方案并不能最大限度达到目标，却代价小、耗时短、风险小。这就需要全面考虑，综合权衡。既考虑到当事银行的要求，又考虑成功和失败的因素和有利不利的因素。我们认为，诉讼策略方案的选择应以“银行利益最大化”为标准，在既定风险情况下追求收益最大化，在既定收益情况下追求风险最小化。
准确的选择方案，还要求有科学的评选方法。评选谋略方案的具体方法，通常有三种类型：（1）经验判断法。即人员根据日常的办案经验来评选方案。这是比较古老的评选，也是目前常用的办案方法。人员根据自己的办案经验和掌握的材料，权衡案件处理时对当事人的利弊得失，做出选择，这在一定范围内和通常情况下是适用的，可以作为评选谋略方案的重要依据。但是，人员的办案经验必然有一定的局限性，在办理新的案件时，不能盲目照搬过去的经验，哪怕是成功的经验。（2）数学分析法。许多复杂的案件处理无法依靠经验直接判断优劣，特别是那些关系复杂、带有链环性质的法律纠纷案件，需要依靠数学分析方法，计算案件处理的各个环节中，得与失的经济数量。然而，由于案件涉及的多样性，特别是刑事、行政案件，有许多无法量化的社会因素，因此人员选择谋略方案时难以纯粹依靠数学分析的方法。（3）试验法。在时间、环境及其它条件允许的情况下，可以将诉讼策略方案在小范围内进行试验，看是否能取得成效，以此作为最后评选确定诉讼策略方案的依据。
4.实施方案，完善策略
诉讼策略方案的实施，是策略运筹的最后一个环节。策略是行动的选择，行动是策略的执行。在诉讼策略方案实施阶段，主要是做好以下四个方面的工作：
（1）编制实施计划，把谋略步骤具体化。按诉讼程序编制每一程序的谋略实施计划。同时，还要做好潜在问题的防范分析，预估每个阶段甚至下一个阶段可能出现的潜在问题，并制定出有关的预防措施和应变对策，将这些措施落实到策略方案的实施计划中去。
（2）借助适当的方式予以实施。一是借助诉讼程序的推进予以实施；二是通过非诉讼途径予以实施，如主持非诉讼调解等；三是借助己方当事人的行为实施。通过己方当事人变更原有的法律行为，变更原有的法律关系，达到实施谋略的目的。
（3）进行反馈调节。在施谋过程中，及时发现谋略方案实施中出现的新问题，针对变化情况，及时提出新的谋略方案与谋略目标。
（4）纠正策略偏差。由于案件主、客观条件的变化，在谋略实施过程中，难免会发生偏差，需要及时修正。世界上只有相对正确的策略，没有绝对正确的、放之四海而皆准的策略。即使是正确的谋略，也有可能因为案件情势的变化，需要进行调节与完善，甚至在个别情况下，策略已经实施的情况下，还需要重新立谋施谋。这在诉讼实务中是相当常见的。通过这些调整，对已初步制定的诉讼策略进行效果评估，进一步进行审查、校正，可以进一步完善策略，以防止决策的失误，导致诉讼不利。
第一，计提专用基金的问题。事业单位计提修购基金、勤工助学基金、奖贷基金时既没有资金的流出或流失，净资产也没有减少，只不过在支出增加的同时增加了事业单位的净资产。只有在事业单位的专用基金发生耗费时，才会导致资金的流出或损失。由此可知，提取专用基金并没有发生资金的耗费及损失，也不符合收付实现制的原则，因此不能构成事业单位的支出。
第二，基本建设支出的问题。事业单位会计准则将用于基本建设的支出单独列出，并明确基本建设支出是指事业单位列入基本建设计划，用国家建设资金或自筹资金安排的固定资产新建、扩建和改建形成的支出，这主要是由于事业单位作为一个会计主体实行事业单位会计制度和建设单位会计制度两套账的原因。然而，事业单位财务规则的支出管理中却没有将基本建设支出纳入支出范围，事业单位会计制度只将除财政补助收入以外的资金安排自筹基本建设，其所筹集并转存建设银行的资金纳入结转自筹基建支出中进行核算。定义口径的不一致造成事业单位财务规则、事业单位会计准则和事业单位会计制度的不统一。而从另一方面看，结转自筹基建是将财政补助收入以外的资金转存建设银行，是货币资金在不同的账务体系中循环，并没有发生资金耗费或损失，不符合确认支出会计要素的定义，并不是真正的支出。
第三，与财政体制改革的有关规定不相符。我国实行新的预算会计制度以来，以公共财政体制框架为目标的财政体制领域进行了一系列改革，包括部门预算、国库集中收付制度、政府采购及政府收支分类改革。上述财政体制的改革也使事业单位会计制度核算的内容发生了新的变化，原有的会计要素定义及会计记账基础面临新的挑战。随着国库集中收付制度的实施，事业单位预算内的资金支付只是一种额度的减少或者说是虚拟价值的流动，并没有资金流出或流失。此外，随着政府采购和国库集中支付制度的实施，出现了采购环节与付款环节的脱节，出现货物已经到达但发票账单还没有到达或货款已经支付但货物尚未到达的情况，在付款方式上也存在一次付款、分期付款、预留保修金等尾款，如果按传统的支出会计要素定义和收付实现制来确认支出的话，根本无法处理。
第四，接受捐赠资产处理的问题。按照事业单位会计准则规定，其他收入反映事业单位接受捐赠未限定用途的财物。事业单位会计制度规定在接受固定资产捐赠时借记“固定资产”，贷记“固定基金”。笔者认为这样处理并不完整，因为没有反映事业单位接受的捐赠收入。此外，高等学校会计制度还规定，高等学校在收到固定资产捐赠时借记有关支出科目，贷记“其他收入――捐赠收入”，同时借记“固定资产”，贷记“固定基金”。这样处理，虽然使事业单位的接受捐赠的收入完整反映出来，但是支出却是虚增的，因为并没有发生资金耗费及损失，不符合支出会计要素的定义。
第五，经营性业务的问题。事业单位会计准则规定，会计核算一般采用收付实现制，但经营性收支业务核算可采用权责发生制。按照财政部对《民间非营利组织会计制度》的解释，在权责发生制会计下，不存在收付实现制的“支出”这一会计问题，故没有设置预算会计中的“支出”这一会计要素。但是事业单位由于业务活动的多样化、复杂化，其经营活动实际上与企业的生产经营业务没有实质区别，理应将当期经营活动的收支项目进行配比。此外，由于事业单位需要缴纳事业单位企业所得税，如果用现行支出会计要素定义，那么事业单位的纳税调整工作量相当大。
第六，投资亏损问题。事业单位会计制度规定转让债券投资以及到期兑付债券本息，按实际收到的金额，实收金额与账面金额的差额，借记或贷记“其他收入”科目。实际上投资亏损应该属于事业单位开展其他活动所发生的资金损失，将其冲减“其他收入”是不适当的。
第七，利息支出的问题。事业单位的利息支出只有在实际发生时列为支出，但是在事业单位账上反映的利息支出采用费用化处理，而在建设单位反映的借款利息却可以资本化处理，同样用于固定资产建设的利息因为会计处理的不同导致不同的结果。
第八，固定资产和无形资产的核算问题。事业单位固定资产购置支出在费用化处理的同时增加“固定资产”和“固定基金”，不计提折旧。事业单位固定资产反映事业单位固定资产的初始价值，无法反映事业单位的固定资产净值，也无法反映受托事业单位的资产保全责任。其弊端是：一是价值背离。固定资产的账面价值与实际价值随着时间的推移越来越远。二是虚增资产。在资产负债表上固定资产按原值反映，没有体现固定资产的磨损程度，虚增了资产总量。三是成本不完整。事业单位在购置无形资产时，借记“无形资产”，贷记“银行存款”等科目，不实行内部成本核算的事业单位一次记入“事业支出”，贷记“无形资产”科目，事业单位购入或自行开发的无形资产在投入使用的月份一次性摊销记入“事业支出”科目，从投入使用的月份起资产负债表无形资产金额为零。但实际情况是无形资产的价值较大，使用期限较长，则会造成严重的账实不符。
