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全市20个接种单位均有通过网络平台下载异地儿童接种信息,异地下载使用覆盖率100%。全市下载异地儿童25097人,占全市建档儿童数的7.5%,其中异地迁入儿童占76.6%,临时接种占23.4%。2.5短信功能使用情况2012年8月免疫规划平台短信功能开通,至2013年12月31日,全市接种单位共发送预约和漏种催种短信2748次,合计64446条。
2讨论
国家儿童预防接种信息管理系统的建设,实现了儿童预防接种信息管理由传统的手工管理模式向计算机信息化管理的转变;而福建省免疫规划管理平台的建立则实现了网络数据交换,信息共享,是免疫规划管理信息化的又一里程碑。分析2005—2013年全市建档情况,省市内流动儿童占全市建档儿童数的68.4%,其中44.8%为外市进入本市,23.6%为本市内变更接种点。可见免疫规划信息管理网络平台的建设适时解决了接种对象流动性大的难题。全市30d及时建档率低,平均仅18.2%,无法保证预防接种特别是流动儿童接种的顺利接种。原因除因系统未与产科对接,首针接种后未立即建档外,部分接种登记人员对系统操作不熟悉,习惯采用现场手工登记在册,过后再重新录入系统有关。分析显示,全市接种单位儿童个案上传及时率为100%,但上传成功率仅84.5%,主要是部分单位的个案因未联网而进行多个系统同时录入,使得内部个案编码重复以致无法上传。上传的在册儿童个案中,暂住儿童和流动儿童占我市接种儿童的3/5,为主要接种人群。且2007—2011年儿童数呈平稳走势,基本处于9年平均值上下(图1),说明在国家服务器关闭后,各接种单位仍坚持在信息系统录入,2005—2006年的数据因补录不全以致儿童数未达到平均水平。2012—2013年儿童个案总数明显高于平均水平,2012年增幅达39.8%,得益于我省建立了居民健康信息系统免疫规划管理子系统,省内各接种单位实现了数据共享,提高了接种人员的建卡积极性,而便利的异地下载功能也使得原先接种点变动频繁的儿童纳入了信息系统管理。
从重复建档情况看,点内重复建档仍占21.6%,说明部分接种单位未定期清理系统内重卡,点外重卡多数为平台建设前已录入的儿童个案,需上级疾控部门对点外重卡及时合并。全市所有接种点均已启用异地下载功能,有1/3的流动儿童为异地迁入儿童,说明异地下载功能可正常有效地使用。免疫规划信息管理网络平台短信功能的开通,实现了接种预约、漏种儿童催种,在查漏补种活动中也发挥重要作用,为全市免疫规划的实施带来便利。
1材料与方法
1.1药物及试剂舒关温经冲剂(SGWJCJ)由制川乌、川断、威灵仙、土鳖虫等药组成。舒关清络冲剂(SGQLCJ)由生地、功劳叶、雪花、鬼箭羽等药组成,県痹冲剂(WBCJ)为大连长白山制药有限公司出品。抗大鼠IgG免疫血清,由镇江医学院检验系提供。
1.2实验动物体重150~200g雄性大白鼠(SD),由南京中医药大学实验动物中心提供。
1.3方法大鼠佐剂性关节炎模型,参照Freund''''s完全佐剂性关节炎法[2],将大鼠随机分为6组,每日分别灌服不同的药物,连续21d。另组灌生理盐水作正常对照。28d后大鼠眼眶取血进行免疫指标测定。
2结果
2.1IgG含量和循环免疫复合物(CIC)测定采用单向免疫扩散法测IgG,DEG6000沉淀法/比浊法测CIC,结果IgG(Dimm)正常组11.300±1.930,模型组14.100±0.487,比正常组显著增加,P<0.01,舒关温经冲剂和舒关清络冲剂小剂量组为11.388±2.205和11.838±1.604,均显著低于模型组,P<0.01,而两冲剂的大剂量组降低不明显,CIC各组数值变化不显著。
2.2红细胞免疫功能测定[3]结果见表1。
表1舒关冲剂对大鼠佐剂性关节炎红细胞免疫功能的影响(±s,%)
Tab.1EffectsofSGCJonRBC-C3b-R&RBC-IC-Rofratswithadjuvantarthritis(±s,%)
Dose(g/kg)nRBC-C3b-RRBC-IC-R
Normal—815.667±4.6676.500±2.811
Model—810.875±2.6961)10.625±2.5602)
SGWJCJlargedosage4.8914.888±2.9773)10.286±2.430
SGWJCJlittledosage1.6712.857±2.9113)9.182±2.603
SGQLCJlargedosage4.8816.375±2.6154)9.625±2.825
SGQLCJlittledosage1.6814.625±5.3443)8.125±1.8853)
WBCJ6.01115.730±4.6903)9.444±2.639
Note:1)P<0.05,2)P<0.01,vsnormal;3)P<0.05,4)P<0.01,vsmodel
3讨论
目前普遍认为类风湿性关节炎的发病过程是免疫调节功能失调和红细胞免疫功能异常两者共同作用的结果[4]。
利用Freund''''s完全佐剂刺激SD大白鼠形成免疫反应,造成免疫功能失调。本次实验中模型组与正常对照组比较:RBC-C3b受体花环率下降(P<0.05),RBC-IC花环率上升(P<0.01),IgG上升(P<0.01),CIC也有所提高(P<0.05),这与以往的一些报道相符[1,4]。红细胞免疫是机体免疫系统的重要组成部分,而红细胞主要通过膜上C3b受体粘附免疫复合物,携至肝、脾,由吞噬细胞吞噬[5]。因此红细胞C3b受体活性的强弱直接影响机体中免疫复合物的被清除的程度,类风湿性关节炎患者是由于抗原进入机体被巨噬细胞吞噬并与其膜上的HLA-DR分子结合成复合物引起免疫反应,激活B淋巴细胞,分泌大量免疫球蛋白,又与自身IgG结合形成CIC沉积在关节膜,激发胶原酶和破骨细胞致使关节软骨和骨破坏而发病。我们这次试验说明舒关温经冲剂、舒关清络冲剂能有效地恢复红细胞的抗原提呈功能,从而调节免疫紊乱,以恢复机体的正常免疫功能,这对机体祛除病邪及疾病的恢复有着积极的作用。
许化溪镇江医学院检验系,镇江212001
作者简介:陆跃鸣,女,39岁,实验师;
周学萍,女,39岁,中医内科博士,副研究员
作者单位:(南京中医药大学,南京210029)
4参考文献
1何绍奇主编.现代中医内科学.北京:中国医药科技出版社,1991:506-508
2徐叔方.药理实验方法学.北京:人民卫生出版社,1985:534-536
3郭峰.红细胞免疫功能的初步观察.中华医学杂志,1982;61(12):715
关键词肺心病红细胞免疫功能脂质过氧化
Relationshipbetweenperoxidationinerythrocytemembraneandandredcellimmunefunctionincorpulmonalesubjects
JIANGYong-Tang,CHENXue-Kui,ANJi-Hongetal.
DepartmentofRespiratorySystem,The2ndClinicColleage-NornamBethuneUniversityofMecicalSciences,Changchun130041
AbstractObjective:Toevaluatetherelationshipbetweenperoxidationinerythrocytemembraneandredcellimmunefunctionincorpulaonale.Methods:Theredcellimmunefunctionandthelevelsofmalonyldialdehyde(MDA)inplasmanderythrocytemembraneweretestedbyredcellyeastmixtureroseandthiobarbituricacid(TBA)methods.Results:ThelevelsoferythrocyteC3breceptorwassignificantlydecreasedinacutestagecorpulmonale(P<0.01).ThelevelsofplasmaanderythrocytemembraneMDAincorpulmonalewerehigherthanthoseinhealthy(P<0.01).Conclusion:Theresultsindicatedthatlipidperoxidation,particularlyinerythrocytemembrane,mightcontributetothedecreaseoferythrocyteofreceptor.
KeywordsCorpulmonaleRedcellimmunefunctionLipidperoxidation
丙二醛(MDA)是脂质过氧化反应中重要的中间产物,MDA可严重损坏细胞膜组分、结构和功能〔见:JainSK.Theaccumulationofmalonyldialdebyde,anendofproductoffattyacidperoxidation,candisturbaminophospholipidorganizationinthemembranebilayerofhumanerythrocyte.JBiolChem,1984;259:339〕。红细胞膜上存在具有免疫粘附活性的C3b受体,由于红细胞免疫粘附(Redcellimmuneadherence,RCIA)作用,红细胞得以发挥携带和清除循环免疫复合物(CIC),促进吞噬细胞吞噬,调节细胞免疫等多种功能〔见:郭峰.红细胞免疫研究概况.中华微生物学和免疫学杂志,1995;15(3):18〕。为探讨肺心病患者红细胞膜MDA对红细胞C3b受体的影响,我们自1995年9月~1996年4月选择住院肺心病患者进行观察,报道如下。
1材料与方法
1.1病例选择正常对照组:体检健康者24例,肺心病组:60例。全部病例分两组:急性期32例,恢复期28例。
1.2方法
1.2.1红细胞C3b受体花环率(RBC-C3bRR)和红细胞免疫复合物花环率(RBC-ICR)试验采用郭氏方法。
1.2.2红细胞膜脂质过氧化水平测定血浆及红细胞膜MDA测定用内藤氏法。膜蛋白定量采用Lowry法。
1.3统计学处理两组间比较用t或t′检验,用直线相关分析和多元逐步回归分析判定各指标间的关系。
2结果
2.1红细胞免疫功能肺心病RBC-C3bRR明显降低,RBC-ICR和正常无显著差异。血浆MDA和红细胞膜MDA水平明显升高。急性期肺心病患者RBC-C3bRR和RBC-ICR显著低于恢复期患者,后者RBC-C3bRR降低和血浆MDA升高仍和正常组有显著差异。RBC-ICR升高和红细胞膜MDA升高与正常组无明显差异。
2.2红细胞C3b受体活性和脂质过氧化损坏关系肺心病患者血浆MDA和红细胞膜MDA水平呈正相关,血浆和红细胞膜MDA水平升高和RBC-C3bRR降低呈负相关,多元逐步回归分析血浆及红细胞膜MDA与红细胞C3b受体的偏回归系数分别为-0.1160,-0.1613,复相关系数R=0.7601。提示红细胞膜MDA和红细胞C3b受体关系更密切,见表1,表2。
表1肺心病患者血浆MDA和红细胞膜MDA与红细胞C3b受体花环率相关分析(n=60)
Tab.1RelativeanalysisbetweenRBC-C3bRRandMDAinplasmaanderythrocytemembraneincorpulmonal(n=60)
Dependent
variableIndependentrP
RBC-MDAP-MDA0.9209<0.01
RBC-C3bRRRBC-MDA
P-MDA-0.8718
-0.7339<0.01
<0.01
表2红细胞免疫功能、血浆和红细胞膜MDA水平测定结果
Tab.2Resultofredcellimmunefunction,MDAinplasmaanderythrocytemembrane
nRBC-C3bRRRBC-C3bRRP-MDARBC
(±s,%)(±s,%)(nmol/ml)(μmol/ml)
Normalcontrol2419.50±4.308.25±6.154.67±0.100.452±0.026
CorPulmonale6010.87±4.851)7.94±5.774.62±0.241)0.569±0.0081)
Remissionstage2815.55±2.731)9.30±6.175.12±0.141)0.469±0.046
Acutestage326.78±1.032)6.74±4.932)7.55±0.212)0.641±0.0572)
Note:vsnormalcontrol,1)P<0.01;2)vsremissionstage,P<0.01
3讨论
本组资料显示:肺心病患者红细胞C3b受体花环率明显降低,红细胞免疫复合物花环率无明显改变。提示红细胞C3b受体降低,红细胞免疫粘附功能降低,为原发免疫功能低下,即红细胞膜上C3b受体受到破坏和影响所致。我实验室曾报道肺心病患者血浆MDA水平升高。本研究进一步证明其红细胞膜MDA亦增高,两者呈正相关。MDA是脂质过氧化降解的中间产物,脂质过氧化作用可严重破坏细胞膜成分、结构和功能。相关分析发现肺心病患者MDA升高和红细胞C3b受体活性呈明显负相关。进一步多元逐步回归显示两者关系更为密切。提示血浆MDA升高,尤其是红细胞膜MDA升高可以严重影响C3b受体活性。
幽门螺杆菌(Hp)作为慢性胃炎、胃十二指肠溃疡、胃癌、胃淋巴瘤发生发展中的重要致病因素已为大量研究证实,其致病机理包括Hp的尿素酶、蛋白酶、脂酶、磷脂酶A、趋化因子及细胞空泡毒素(VacA)等直接致病,也包括Hp引起宿主的炎症及免疫应答致病[1]。本文主要就Hp菌苗与宿主的免疫应答及相关问题的研究进展作一简要综述。
hp与菌苗研究
Hp感染是世界范围的,而且是终身感染。新近研究显示,口服菌苗可诱导针对Hp感染的保护性免疫,并且菌苗可治愈已存在的HP感染性病变,从而表明用菌苗治疗Hp感染是可行的[2]。用霍乱毒素(CT)B亚单位或大肠杆菌不耐热毒素(LT)作粘膜佐剂的Hp抗原诱导免疫已获成功,即Hp对宿主自然免疫应答的抵抗能被瓦解。成功用作Hp菌苗的抗原有Hp细胞裂解产物、尿素酶、VacA、热休克蛋白和过氧化物酶等。免疫学研究及动物模型也证实口服免疫不仅可以预防而且能治愈Hp感染,并且鼻内及结肠免疫均可引起胃粘膜的免疫保护[3]。新近Ghiara等用重组VacA或细胞毒素相关蛋白(CagA)作抗原,减毒的大肠杆菌LT突变体作为佐剂,成功地根除了小鼠模型中的慢性Hp感染,并证明该治疗性菌苗对Hp再感染有同样有效的免疫防御作用[4]。总之Hp作为非侵入性细菌,定居于胃粘膜表面,可引起机体的免疫及炎症反应。面对机体强大的免疫应答,Hp仍能继续生存并致病,其机理尚不清楚。免疫效应分子必须进入胃粘膜表面,才能中和和杀伤Hp。目前认为该作用与胃分泌液中出现抗Hp特异性分泌型IgA抗体相关。这种抗体也在感染的动物及人体中出现,所以细胞免疫效应在防御或治疗Hp感染中的作用仍需进一步研究。另外,了解Hp逃逸免疫效应分子的机理以及Hp菌苗诱导宿主的免疫保护及免疫损伤的机理,将为更有效的菌苗筛选提供可能。最近报道对Hp感染的易感性与小鼠中主要组织相容性复合体(MHC)位点直接相关,这是否适用于菌苗设计也需进一步研究证实[5]。
hp与宿主免疫
Hp诱导宿主免疫应答的途径,目前认为包括Hp可溶性产物的被动吸收,上皮细胞直接内吞细菌抗原,抗原通过被破坏的胃上皮进入组织激发机体的免疫应答[6]。粘膜对不同Hp免疫应答的差异是决定病变后果的重要因素。其中包括B细胞及相应的IgG、IgM的体液免疫应答,以及在Hp感染相关慢性活动性胃炎病变局部出现T淋巴细胞浸润的细胞免疫应答[1]。
Hp与体液免疫
实际上所有Hp感染慢性胃炎病人胃粘膜中均有针对Hp的特异性IgA出现,而IgM应答一般只发现于Hp感染急性期的胃粘膜局部。产生IgG(特别是IgG1)的浆细胞,在慢性胃炎中明显增加。在胃十二指肠粘膜局部证明有针对Hp感染的特异性IgG应答。粘膜表面分泌型IgA的出现对于抑制细菌抗原的摄取、阻止Hp的粘附和移动以及中和毒素都非常重要,即IgA在Hp感染中起保护性免疫作用。另外,由于IgA不能有效地激活补体,从而在阻滞Hp特异性IgG介导的补体活化及相关的中性粒细胞活化炎症及介质释放中起重要作用。Hp特异性IgE抗体在感染病人的血清中同样存在,但依赖Hp特异性IgE的肥大细胞释放组胺是否在胃粘膜病变中起作用尚不清楚[6]。
Hp与细胞免疫
针对Hp特异性T细胞也出现于Hp感染病人的胃粘膜中,其中CD45RO+T细胞在Hp感染相关的慢性胃炎病人的胃粘膜中明显增加。分泌γ干扰素而不是白细胞介素4(IL-4)的T细胞在病变局部的浸润也证实Hp诱导的特异性免疫应答以Th1型应答为主。Hp抗原特异性T淋巴细胞应答,不仅参与调节针对Hp的体液免疫应答,而且参与调节胃粘膜上皮中与粘膜防御及抗原呈相关的关键分子的表达[6]。新近研究发现,Hp诱导的抗原特异性T淋巴细胞以辅T淋巴细胞为主,包括Th1及Th2细胞。其作用包括两个方面:增强炎症反应及减少Hp在胃粘膜表面生存。未免疫小鼠感染Hp主要诱发Th1型应答,通过增加γ干扰素分泌而增强胃粘膜损伤性的炎症反应。相反,Hp菌苗抗原免疫后的小鼠感染Hp既诱发Th1型应答,又诱发Th2型应答。Th2型应答通过增加IgG1抗体、IL-4和IL-5的产生而减少Hp在胃粘膜表面的生存,起免疫保护作用。Hp及其菌苗诱导Th1和Th2细胞的作用共存,即增强炎症反应的损伤性作用及减少Hp在胃粘膜表面生存的免疫保护作用同时存在。Hp感染诱导的应答以Th1型为主,即以炎症性损伤为主;而疫苗诱导的应答以Th2型为主,即以免疫保护为主。中和γ干扰素可阻断Th1型免疫应答,减轻Hp的致病作用,及增强Th2细胞在疫苗免疫保护中的作用,从而达到治疗目的[7]。
hp诱导的自然杀伤(NK)细胞在宿主的防御及炎症反应中起重要作用。外周血淋巴细胞与Hp的相互作用诱导非MHC限制的NK细胞活化并分泌γ干扰素,NK细胞的活化及γ干扰素的分泌对于激活巨噬细胞及促进Th1型抗原特异性T细胞应答均非常重要。另外,作为NK细胞的活化因子,IL-12可由Hp刺激的中性粒细胞及单核细胞产生[6]。
Hp与自制免疫
一些Hp中脂多糖(LPS)的O-特异性多糖链抗原区结构与岩藻糖化的Lewisy血型抗原类似,而另一些菌株与LewisY血型抗原类似[8]。一些抗Hp的单克隆抗体与人和鼠的胃上皮细胞存在交叉反应。这种交叉反应与LPS模拟或Hp58kDa蛋白相关。该58kDa蛋白属于热休克蛋白(hsp60)家族成员,与人hsp60有高度同源性。而在T细胞水平上不存在宿主与细菌hsp60的交叉反应。根除Hp感染的结果表明无论是抗LPS决定簇还是hsp60的自身免疫应答,对胃粘膜的完整性没有长期的破坏作用[6]。Ko等用214种抗Hp的单克隆抗体检测其与人组织交叉反应能力,结果发现71种抗体与胃粘膜中Hp起反应,25种抗体与胃上皮细胞反应,8种抗体与十二指肠上皮细胞反应。与胃上皮细胞起交叉反应的抗体包括抗Hp尿素酶抗体、抗鞭毛抗体、抗LPS抗体及抗热休克蛋白抗体。提示Hp引起的宿主自身免疫应答涉及多种Hp成分[9]。Faller等发现Hp感染与抗胃小凹上皮细胞膜及壁细胞中小管结构的自身抗体明显相关[10]。另外新近研究发现,HpLPS表达人血型抗原并非固定不变,而是呈现期相性改变,包括三种类型变异体:第一种是表达Lewisx型抗原的LPS失去α1,3-岩藻糖,变为I抗原,这种改变是可兼管的;第二种是LPS的Lewisx抗原失去聚合主链成为表达单体的LewisY抗原;第三种是LPSlewisY抗原获得α1,2-岩糖,使LewisX和LewisY抗原的表达均被增强。表明同一Hp菌珠存在不同的Lewis血型抗原[11]。HPLPS的O-多糖抗原与Lewis血型抗原这种类似结构是否有种于Hp生存、引起宿主的自身免疫应答、促进Hp粘附及增强炎症反应尚需进一步研究证实[8]。
Hp与免疫抑制
有研究提出Hp直接诱导宿主的免疫调节,使针对Hp的有效免疫不能发生。Hp胞浆中一种非细胞毒素蛋白可以抑制外周血单个核细胞增殖,该蛋白分别抑制单核细胞表面CD14及T细胞表面CD25分子的表达[12]。Hp诱导的免疫调节对免疫介导的粘膜损伤有一定的保护作用,但同时也导致Hp感染的长期持续存在。尽管Hp能刺激宿主免疫系统产生抗体及细胞因子,但是Hp亦产生一种介导抑制人细胞免疫的蛋白质,并且Hp编码的超氧化物歧化酶(SOD)基因与侵袭性细胞内致病菌的SOD基因存在同源性,提示SOD涉及辅助Hp抵抗吞噬细胞的杀伤作用[8]。另外也有研究发现活Hp可下调病毒特异性CD8+细胞毒性T细胞应答及Th1细胞分泌细胞因子的反应,从而降低宿主的细胞免疫应答[13]。
hp与MHC
hp诱导的NK细胞分泌的γ干扰素使胃上皮细胞MHCⅡ类抗原表达增高,即增加对胃上皮细胞的细胞毒损伤作用[6]。Maekawa等发现Hp诱导胃上皮细胞MHCⅡ类抗原分子的表达比γ干扰素的作用强,并且胃上皮细胞可以起抗原提呈细胞的作用而参与对Hp的免疫应答[14]。
结语
Hp对宿主的影响及宿主对Hp菌苗的应答既包括炎症反应,也包括免疫应答;既涉及体液免疫应答,也涉及细胞免疫应答;既存在免疫保护作用,也存在免疫损伤作用。因此,深入研究并阐明Hp及其菌苗诱导宿主免疫应答的机理,将为有效的Hp菌苗的研制提供正确的理论指导及新的研究思路。
参考文献
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12KnippUetal.FEMSImmunolMedmicrobiol,1994;8:157-166
[关键词]妊娠相关血浆蛋白A;固相时间分辨荧光免疫;亲和素—生物素—聚乙烯胺—4,7二氯磺苯基1,10啡罗啉2,9二羧酸—铕复合物;唐氏综合征
DevelopADirectSolidPhaseLanthaneTimeresolvedFluoroimmunoassayReagentofPAPPAutilizingPVA
Abstract:ObjectiveTodevelopadirectsolidphaselanthanetimeresolvedfluoroimmunoassayreagentofPAPPAbysynthesizingacomplexof(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+.MethodsPolyvinylamine(PVA)waslabeledwithbiotinstreptavidinandeuropiumchelateof4,7bis(chlorosulfophenyl)1,10phenanthroline2,9dicarboxylicacid(BCPDA).UsinglabeledPVAcomplex,WedesignedtwositesandwichtimeresolvedfluoroimmunoassayofPAPPAandevaluatedassaycharacteristicsofPAPPAkit.ResultsWesuccessedsynthesizingaconjuageteof(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+andareagentofPAPPA.Detectionlimitsachievedwere0.7mIU/L.Thecalibrationcurvewaslinear010000mIU/L.Intraandinterassayimprecision(CV)was3.89%4.96%and7.35%9.27%.Recoverywas95.8%104.2%.ConclusionsTheconjugateof(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+synthesiziedwasreactive,highlyfouorescent.Asortsofkitcouldbesynthesized,takingadvantageofit.ThereagentofPAPPAwaspotentiallysuitedforuseinclinicalwithhighlyanalyticalsensitivity.
Keywords:PregnancyassociatedplasmaproteinA;Directsolidphaselanthanetimeresolvedfluoroimmunoassay;StreptavidinbiotinPolyvinylamineeuropiumchelateof4,7bis(chlorosulfophenyl)1,10phenanthroline2,9dicarboxylicacid;Down''''sSyndrome
妊娠相关血浆蛋白A(PregnancyassociatedplasmaproteinA,PAPPA)是一种高分子α2糖蛋白,20世纪70年代在孕妇血清中被发现[1]。在孕妇血中主要PAPPA是胎盘滋养层组织分泌,它是一种异源四聚体,由两个分子量为200000~250000亚基构成。PAPPA亚基和两个嗜红细胞主要基础蛋白(Proformofeosinophilmajorbasicprotein)以二硫键结合而成[2],在孕妇血中只存在微量游离单体PAPPA。PAPPA亚基由1547个多聚核苷酸构成,包括1个拉长的锌指结构,3个Lin—notch重复序列,以及5个短一致重复序列[3]。在体内PAPPA是一种蛋白酶,主要针对胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP4)和胰岛素样生长因子结合蛋白5(IGFBP5)起作用。胰岛素样生长因子I(IGFI)在促进细胞分裂和增殖起重要作用,它主要通过IGF1受体起作用,IGFI、II的生物活性受6个高亲和性IDFBP调节[4,5]。PAPPA主要用于产前筛查唐氏综合征(Down''''sSyndrome,DS),迄今医学上对此病尚无有效的治疗和预防措施,只能通过产前筛查防止DS儿的出生,但目前开展的绒毛活检,羊水穿刺及脐带血穿刺均为侵入性检查,有1%~3%的流产率,且方法繁琐,出报告时间长,不适宜大范围孕妇的普查,仅限于高危人群的诊断。大量报道认为PAPPA可作为DS胎儿产前筛查的的标志物。在15周~20周通过结合孕妇孕周、超声诊断和FreeβHCG可以鉴别65%~75%,但要在3个月~6个月结合AFP、游离E3以及抑制素上述成分可鉴别85%~90%[6]。有文献[7]报道PAPPA在急性冠状动脉综合征(ACS)的早期诊断有一定的意义,PAPPA在ACS患者血清含量<30mIU/L,同时结构不同于孕妇体内的PAPPA且存在动态变化,必须利用超灵敏的方法进行检测。国内PAPPA的诊断试剂大多为ELISA和PerkinElmer公司生产的解离增强时间分辨荧光免疫分析(dissociatedenhancelanthanetimeresolvedfluoroimmunoassay,DELFIA)试剂,无国产PAPPA时间分辨荧光试剂。我们利用PVA(聚乙烯胺)作为载体结合BCPDA镧系螯合物合成一种高灵敏的固相时间分辨荧光免疫分析(directsolidphaselanthanetimeresolvedfluoroimmunoassay,DSLFIA)试剂。为提高检测灵敏度和克服BCPDA标记抗体使抗体失活的问题,我们引入了生物素亲和素(biotinstreptavidinsystem)系统。
1材料和方法
1.1材料
1.1.1试剂4,7二氯磺苯基1,10啡罗啉2,9二羧酸[4,7bis(chlorosulfophenyl)1,10phenanthroline2,9dicarboxylicacid,BCPDA自制];纯化亲和素(Streptavidin,SA,Sigma公司);硫代琥珀酰亚氨6生物素氨基己酯类[Sulfosuccinimidyl6''''(biotinamido)6hexanamidohexanoate,SulfoNHSLCLCBiotin,pierceChemicalCompany];聚乙烯胺氢氯化物(Polyvinylaminehydrochloride,PVA,ChemicalDynamicsCorp);硼酸钠、二甲亚砜(天津化学试剂有限公司);单克隆抗体根据文献[5]选择Hyb234—5(StatensserumInstitut)作为检测抗体,mAb10E1(HyTestOy,Finland)作为捕获抗体;PAPPA标准品和质控品购于PE公司(质控血清:Control1508mIU/L,Control22325mIU/L,Control3为4952mIU/L);鼠IgG(晶美公司)。
1.1.2仪器Wallac1420多标记计数仪(WallacOY,Finland);HPLC硅柱TSK250尺寸排阻柱(BIORAD公司);96白色微孔板(NUNC公司)、亲和素包被板(InnotracDiagnosticsOy公司);Amicon可浓缩离心管(Amiconmicroconcentrationunits,MW30000Cutoff)
1.2方法
1.2.1BCPDA的制备参见文献详细步骤[8~10]。
1.2.2生物素聚乙烯胺BCPDA[(Bio)xPVA(BCPDA)y]复合物的构建[11]用0.5M的碳酸盐(pH9.1)缓冲液配制浓度为10mg/ml聚乙烯胺(PVA)溶液,将200μgNHSLCLCBiotin溶于20μl碳酸盐缓冲液中,取200μl上述PVA溶液加入20μl上述NHSLC—LCBiotin溶液中,振荡混匀,室温反应1.5h(PVA∶Bio=1∶15),用0.5M碳酸盐缓冲液将混合液稀释到1ml,将固体BCPDA研磨成粉末状,先在上述1ml混合液中加入5mgBCPDA,用力搅拌,直到溶解,重复加3次BCPDA,5mg/次,共计20mgBCPDA,在室温放置5h~6h,直到溶液澄清,转移到透析袋中,用0.1MNaHCO35L透析、过夜、重复透析2次,尽可能除去没反应的BCPDA和生物素。
1.2.3HPLC纯化(Bio)xPVA(BCPDA)y复合物离心浓缩上述(Bio)xPVA(BCPDA)y复合物到0.3ml~0.5ml(用Amiconmicroconcentrationunits,MW30000Cutoff)。流动相0.05MTris缓冲液(pH7.70),控制HPLC流速0.8ml/min,在325nm处监测层析液(325nm为BCPDA最大吸收峰),上样后,马上收集,(Bio)xPVA(BCPDA)y在10管~16管约5ml左右,取10μl(Bio)xPVA(BCPDA)y层析液加入90μl水滴入亲和素包被板微孔中,温育30min,洗板,加入用Tris缓冲液配制的10M~5MEuCl3100μl,反应10min,洗板、干燥,用Wallac1420检测Eu3+的荧光强度,没结合复合物的被洗去了,没结合BCPDA的复合物因无法结合Eu3+而没有荧光,计算标记的PVA,大约每分子结合50个~100个BCPDA分子。
1.2.4构建亲和素生物素PVABCPDA[(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+]复合物[11]用0.1MTris缓冲液(pH7.8)配制小牛血清白蛋白(BSA溶液)60g/L,同时加入EuCl3,使Eu3+浓度为10-6mol/ml,用双蒸水配制亲和素溶液浓度为1mg/ml,取上述BSA溶液1ml,加入10μl亲和素溶液,再加入50μl的(Bio)xPVA(BCPDA)y复合物(通过固相免疫分析,棋盘滴定法确定最佳用量比,步骤略,结果见后),混匀,55℃温育1.5h,4℃保存备用。
1.2.5(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物反应活性用生物素化的各种浓度(0ng/50μl,0.5ng/50μl,5ng/50μl,50ng/50μl,100ng/50μl)鼠IgG包被96孔微板(同第7步),用60g/LBSA和0.1mol/LTris缓冲液(pH7.8)10倍稀释(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物,在板的微孔中加入100μl稀释后的(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物,室温反应30min,洗板、干燥,测量荧光强度(cpm)。本实验是验证复合物的反应活性。
1.2.6生物素标记10E1抗体[12]用二甲亚砜制备硫代琥珀酰亚氨6生物素氨基乙酯溶液(10mg/ml),将抗体10E1溶于0.1mol/L硼酸钠溶液(pH8.8),每1mg抗体中加硫代琥珀酰亚氨6生物素氨基己酯类溶液210μg混合,室温放置4h,在上述溶液中加入20ml1mol/LNH4Cl,室温反应10min,将反应液进行透析,除去未结合的生物素,将抗体浓度用分析缓冲液配置成8ng/μl,-20℃保存备用。
1.2.7单克隆Hyb234—5抗体包被96孔微滴定板将抗体溶于0.1M磷酸盐缓冲液(pH4.9),配置成5μg/ml抗体溶液,在每一孔中加入80μl抗体溶液,室温反应20h,然后用生理盐水洗3次,然后每孔加120μl0.05MTrisHcl缓冲液(pH7.4含0.9%生理盐水、0.05%NaN3、0.5%小牛血清白蛋白BSA)浸泡2h。吸干缓冲液,干燥,密封4℃保存。
1.2.8样本收集、定标、灵敏度、精密度和回收实验分析过程选取怀孕8周、9周、11周妇女血清各一份,经PE公司的DELFIA试剂和D&G公司的ELISA试剂多次精确测定,值分别为:P1863.27mIU/L;P21273.63mIU/L;P32727.23mIU/L。用标准品稀释液(6%BSATSA缓冲液:150mmol/LNaCl、60g/LBSA、50mmol/LTrisHCl,pH7.8)将标准品稀释浓度为:S00mIU/L(稀释液)、S120mIU/L、S2200mIU/L、S31000mIU/L、S45000mIU/L、S510000mIU/L。标准品定标根据WHOIRP78/610(WHOInternationalLaboratoryforBiologicalstandards,StatensSeruminstitut,Denmark),单位换算:1000mIU/L=4.5μg/ml。在单克隆Hyb234—5抗体包被96孔微滴定板,每孔加入定标液10μl,作8次平行测量,加入50μl生物素标记10E1抗体50μl,混匀,36℃,室温反应20min,洗板6次,加入100μl10倍稀释的(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物,室温反应25min,洗板6次,吹干,Wallac1420测量荧光强度(cpm),取均值,作标准曲线。将S00mIU/L做20次重复测试,计算均值(X)和标准差(s),以X+2s为试剂的最小检测限。将Control1,Control2,Control3依据定标分析过程,同批测量20次,批间测量12次,用于评价精密度。对收集样本(P1、P2、P3)依据定标分析过程进行测量,然后将Control1、Control2、Control3分别等体积加入P1、P2、P3中进行测量,用于评价回收实验。
2结果
2.1用HPLC纯化(Bio)xPVA(BCPDA)y复合物在10min~16min出现(Bio)xPVA(BCPDA)y的吸收峰,没有结合BCPDA的吸收峰在17min~24min出现,见图1。
图1净化(Bio)x-聚乙烯醇(BCPDA)y在高性能液化色谱(TSK-250过滤柱)上的变化图。(略)
流速控制在0.8ml/min,吸光率325nm
2.2用滴定法确定亲和素和(Bio)xPVA(BCPDA)y最佳配比SA量恒定0.01mg/ml,生物素标记的抗体包被分别浓度为0ng/孔、0.5ng/孔、5ng/孔、50ng/孔,缓冲液为pH7.8TrisHcl0.1M,Eu3+10-5M,(Bio)xPVA(BCPDA)y用量从40μl~55μl选择最佳值,50μl复合物荧光强度值(cpm)最佳,如图2。
图2滴定链球菌,(Bio)x-聚乙烯醇(BCPDA)y在10-3MEu3+,0.1MTris-Hclbuffer(pH7.8)缓冲液中的变化,0.01mg/ml链球菌,容积变动范围40μl~55μl,观察到最佳容积为50μl(略)
2.3验证活性用生物素化的各种浓度(0ng/50μl,0.5ng/50μl,5ng/50μl,50ng/50μl,100ng/50μl)鼠IgG包被96孔微板验证(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物的反应活性,在测定范围内成线性分布,见图3。
图3IgG维生素定量法标定曲线(略)
2.4PAPPA定标曲线及灵敏度在0mIU/L~10000mIU/L范围内定标曲线为线性分布,见图4。S0标准重复20次检测均值加2个标准差值代入标准曲线,计算出检测限为0.7mIU/L(数据没显示)。
图4PAPP-A标定曲线(略)
2.5批内、批间精密度对质控血清批内进行20次分析,批间进行12次分析,得到批内变异系数3.89%~4.96%,批间变异系数在7.35%~9.27%之间,见表1。
表1批内、批间变异系数比较(略)
2.6回收实验对收集样本(P1、P2、P3)依据定标分析过程进行测量,然后将Control1、Control2、Control3分别等体积加入P1、P2、P3中进行多次测量,分别计算回收率95.8%~104.2%,见表2。
表2回收实验结果比较(略)
3讨论
临床化学家最关心的问题是分析技术灵敏度,这也是临床诊断试剂的核心。近来,在临床化学检测物质的浓度的范围10-3mol/L~10-16mol/L。PCR以及其他的体外扩增技术使DNA、RNA检测方便、高效、特异。不幸的是蛋白不能复制,最敏感的定量方法是依靠蛋白之间的特异性结合如抗原抗体反应。一个提高蛋白检测灵敏度的方法就是信号放大,即在蛋白上标记可以检测的标记物,通过标记物的信号放大而达到更容易检测的目的。时间分辨免疫学技术是80年代迅速发展起来的的一种公认的最有发展前途的非放射免疫标记技术,其中荧光镧系螯合物具有较大的Stokes位移(275nm),较窄的发射光谱(10nm),较长的荧光寿命(10us~1000us),而被广泛构建时间分辨荧光免疫试剂。临床运用最广泛的是PE公司生产的解离增强镧系时间分辨荧光免疫分析(dissociationenhancedlanthanidefluoroimmunoassay,DELFIA)试剂,它必须使Eu3+与螯合物分离,由于其信号较弱,必须加入增强液来发大信号,操作烦琐且在加样的过程中可能引起外源性的污染,这些弊端影响了它的应用。在1987年,Evangelista和Diamandis合成一种新的螯合物BCPDA,开创了固相时间分辨免疫荧光技术,解决了DELFIA上述问题[8,9],但是BCPDA的较大分子量、表面特性和直接标记蛋白容易引起蛋白的失活对它应用带来一些问题,解决的办法就是连接一个载体。我们实验中引入了PVA作为载体,连接BCPDA和生物素亲和素。PVA直接连接蛋白技术难度较大,而生物素标记蛋白技术比较成熟,同时亲和素有4个生物素结合位点,可以起到信号放大作用,而提高检测灵敏度。我们实验中成功的合成了(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物,用它去识别生物素标记的抗体(见图3),结果显示亲和力非常高。实验关键问题是选择SA和(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物最佳比,我们实验中做了7个浓度梯度,选取结合后荧光强度最大的(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物浓度。利用HPLC层析纯后的(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物回收率是68%。通过实验选择最佳检测抗体浓度、生物素化抗体浓度和标本用量。Jackson[13]分析了提高灵敏度的因素即两个关键的因素与最终的结合分析灵敏度相关:我们监测标记分子(放射性同位素、化学发光剂、荧光团)的能力;结合试剂的质量和实验条件,在临床化学存在一种误导是特别敏感的监测方法(化学发光、时间分辨荧光)能获得好的结果。其实这是错误的,如果实验试剂和条件(抗体的亲和性和特异性,固相结合物的自然特性以及清洗效率)不被选择,很难达到理想的检测效果。为达到较高的灵敏度,需要选择高灵敏度的标记技术、高亲和力的试剂和最好的分析条件(可将试剂的非特异性结合降到最小)。利用镧系螯合物的时间分辨荧光免疫分析是一种高灵敏的标记技术,关键是实验条件的选择,我们验证不同孵育时间下,(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物产出率,以及和生物素化抗体的结合能力(数据不能显示)。经过大量的实验选择了Eu3+的浓度,使其能和BCPDA形成最佳比例(数据不能显示)。反应条件的建立中,我们筛选实验反应温度(18℃~56℃,每5℃选择一次)和反应时间(10min~24h),考虑到临床结果的报告时间,选择了20min(数据不能显示)。经过实验条件选择,形成了PAPPA的定标曲线,通过定标曲线确定最低检测限(见图3)。我们构建的(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物可以用于多种像PAPPA这样利用双抗体夹心法检测的试剂,如AFP等。我们选择构建PAPPA主要考虑到我国产前筛查项目的自产试剂较少,而且DS筛查尤为重要,由于科研经费的问题,没有进行最佳单抗配对实验,只是参考了国外的相关文献。不过我们实验的核心是构建(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物,为以后构建其他试剂做一定的前期工作。我们构建的PAPPA试剂,回收实验和精密度试验显示,完全满足试剂盒要求。在今后的工作中,我们主要验证(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物和成品试剂盒的稳定性,以及进一步和PE公司的PAPPA的DELFIA试剂做大量的临床对比实验。总之,我们成功构建了(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+复合物和PAPPA的成品试剂,它有较高的灵敏度、准确度和精密度,又克服了DELFIA试剂的缺点。
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关键词:界面符号人机工程环境
一、设计界面的涵义
界面的说法以往常见的是在人机工程学中。“人机界面”是指人机间相互施加影响的区域,凡参与人机信息交流的一切领域都属于人机界面。“而设计艺术是研究人一物关系的学科,对象物所代表的不是简单的机器与设备,而是有广度与深度的物;这里的人也不是“生物人”,不能单纯地以人的生理特征进行分析。“人的尺度,既应有作为自然人的尺度,还应有作为社会人的尺度;既研究生理、心理、环境等对人的影响和效能,也研究人的文化、审美、价值观念等方面的要求和变化”。
设计的界面存在于人一物信息交流,甚至可以说,存在人物信息交流的一切领域都属于设计界面,它的内涵要素是极为广泛的。可将设计界面定义为设计中所面对、所分析的一切信息交互的总和,它反映着人一物之间的关系。
二、设计界面的存在
美国学者赫伯特.A.西蒙提出:设计是人工物的内部环境(人工物自身的物质和组织)和外部环境(人工物的工作或使用环境)的接合。所以设计是把握人工物内部环境与外部环境接合的学科,这种接合是围绕人来进行的。“人”是设计界面的一个方面,是认识的主体和设计服务的对象,而作为对象的“物”则是设计界面的另一个方面。它是包含着对象实体、环境及信息的综合体,就如我们看见一件产品、一栋建筑,它带给人的不仅有使用的功能、材料的质地,也包含着对传统思考、文化理喻、科学观念等的认知。“任何一件作品的内容,都必须超出作品中所包含的那些个别物体的表象。”分析“物”也就分析了设计界面存在的多样性。
为了便于认识和分析设计界面,可将设计界面分类为:
1)功能性设计界面接受物的功能信息,操纵与控制物,同时也包括与生产的接口,即材料运用、科学技术的应用等等。这一界面反映着设计与人造物的协调作用。
2)情感性设计界面即物要传递感受给人,取得与人的感情共鸣。这种感受的信息传达存在着确定性与不确定性的统一。情感把握在于深入目标对象的使用者的感情,而不是个人的情感抒发。设计师“投入热情,不投入感情”,避免个人的任何主观臆断与个性的自由发挥。这―界面反映着设计与人的关系。
3)环境性设计界面外部环境因素对人的信息传递。任何一件或一个产品或平面视觉传达作品或室内外环境作品都不能脱离环境而存在,环境的物理条件与精神氛围是不可忽缺的界面因素。
应该说,设计界面是以功能性界面为基础,以环境性界面为前提,以情感性界面为重心而构成的,它们之间形成有机和系统的联系。
三、设计界面存在的方法论意义
当机械大工业发展起来的时候,如何有效操纵和控制产品或机械的问题导致了人机工程学。二战后,随着体力的简单劳动转向脑力的复杂劳动,人体工学也进一步地扩大到人的思维能力的设计方面,“使设计能够支持、解放、扩展人的脑力劳动”。在目前的知识经济时代,在满足了物质需求的情况下,人们追求自身个性的发展和情感诉求,设计必须要着重对人的情感需求进行考虑。设计因素复杂化导致设计评价标准困难化。一个个性化的设计作品能否被消费者所认同?新产品开发能不能被市场所接受?在目前,我国大部分企业实力还并不强大,设计开发失利承受力还不很强的情况下,如何系统地、有根据地认识、评价设计,使其符合市场,就需要对设计因素再认识。利用界面分析法,正是使设计因素条理化,避免将人作为“生物人”的片面和走出笼统地说“设计=科学十艺术”的简单误区。
现代的人机工程学和消费心理学为设计提供了科学的依据,它们的成功就在于实验、调查和数理表述,是较为可系的。同样对设计艺术而言,进行设计界面的分析,也要有生理学、心理学、文化学、生物学、技术学学科基础。从理论上来说,它要直接建立在信息论和控制论的基础之上。相对于机械、电子设计和人机设计,以往人机界面设计把握了技术科学的认识和手段,忽视了人文科学观念与思想。它的界面设计只能存在于局部的思考范围内,只成为一个设计的阶段。
有人以功能论来评判设计。“功能决定形态”曾是20世纪上半叶的设计格言,它的提法是片面的。这是因为:第一,功能不是单一的,它包括使用功能、审美功能、社会功能、环境功能等。“过分追求单一的功能会导致将许多重要内容(装饰性、民族性、中间性)被排斥掉”。而且“有些内容并不是‘功能’的概念所能包括了的,更何况物质和精神的内容也并不是时时处处等质等量的融洽在一个统一体中,随产品的不同、时期的不同,它们各自的主次地位也随之变化”。在现今信息技术高度发展的时代,情感因素越来越成为设计的主要方面。物质意义上的功能在保持其基础地位的情况下,却日益不能代表情感诉求的表述;第二,按“形态服从功能”而设计的产品,对于不熟悉它的使用者来说是难以理解的,产品要为人们所理解,必须要借助公认的信码,即符号系统;第三,满足同一功能的产品形态本来就不是唯一的,象汽车等成熟的产品,年度换型计划等措施成为商品经济中日益不可避免的现象。社会经济发展到一定程度,才能出现设计的专业需求,而这时人们的基本物质需求已能满足,简单地以物质来决定设计是不恰当的。
相反,设计界面体现了人一物交流信息的本质,也是设计艺术的内涵,它包括了设计的方方面面,明确了设计的目标与程序。
四、设计界面的分析
按照设计界面的三类划分,有助于考察设计界面的多种因素。当然,应该说设计界面的划分是不可能完全绝对的,三类界面之间有涵义上也可能交互与重叠,如宗教文化是一种环境性因素,但它带给信仰者的往往更多的却是宗教的情感因素。在这里环境性和情感性是不好区分的,但这并不妨碍不同分类之间所存在的实质性的差异。
1、功能性界面
对功能性界面来说,它实现的是使用性内容,任何‘件产品或内外环境或平面视觉传达作品,其存在的价值首要的是在于使用性,由使用性牵涉到多种功能因素的分析及实现功能的技术方法与材料运用。在这一方面,分析思维作为一种理性思维而存在。如果作为一种处理方式来设计产品,则这种产品会使多种特征性(如民族性、纯粹性)因素中性化,如果去除产品商标,就很难认出是哪国的或哪个公司的产品。当然,这方面也说明了产品中存在着共同性因素,它使全人类能做出同样的反应。人的感觉和判断能力有着国际性的、客观性的特征。
功能性界面设计要建立在符号学的基础上。国际符号学会对符号学所下定义是:符号是关于信号标志系统(即通过某种渠道传递信息的系统)的理论,它研究自然符号系统和人造符号系统的特征。广义的说,能够代表其他事物的东西都是符号,如字母、数字、仪式、意识、动作等,最复杂的一种符号系统可能就是语言。设计功能界面,不可避免地要让使用者明白功能操作。每一操作对人来说应是符合思维逻辑的,是人性的,而对机械、电子来说则应是准确的、确定无疑的,这双方的信息传递是功能界面的核心内涵。
2、情感性界面
一个家庭装饰要赋予人家居的温馨,一副平面作品要以情动人,一件宗教器具要体现信仰者的虔诚。其实任何一件产品或作品只有与人的情感产生共鸣才能为人所接受,“敝帚自珍”正体现着人的感情寄托,也体现着设计作品的魅力所在。
现代符号学的发展也日益这一领域开拓,以努力使这种不确定性得到压缩,部分加强理性化成分。符号学逐渐应用于民俗学、神话学、宗教学、广告学等领域,如日本符号学界把符号学用于认识论研究,考察认识知觉、认识过程的符号学问题。同时,符号学还用于分析利用人体感官进行的交际,并将音乐、舞蹈、服装、装饰等都作为符号系统加以分析研究,这都为设计艺术提供了宝贵与有借鉴价值的情感界面设计方法与技术手段。
3、环境性界面
任何的设计都要与环境因素相联系,它包括社会、政治和文化等综合领域。处于外界环境之中,“是以社会群体而不是以个体为基础的”,所以环境性因素一般处于非受控与难以预见的变化状态。联系到设计的历史,我们可以利用艺术社会学的观点去认识各时期的设计潮流。18世纪起,西方一批美学家已注意到艺术创造与审美趣味深受地理、气候、民族、历史条件等环境因素的影响。法国实证主义哲学家孔德指出:“文学艺术是人的创造物,原则上是由创造它的人所处的环境条件决定。”法国文艺理论家丹纳认为“物质文明与精神文明的性质面貌都取决于种族、环境、时代三大因素”。无论是工艺美术运动、包豪斯现代主义或20世纪80年代的反设计,现代的多元化,“游牧主义”(Nemadism)都反映着环境因素的影响。
环境性界面设计所涵盖的因素是极为广泛的,它包括有政治、历史、经济、文化、科技、民族等,这方面的界面设计正体现了设计艺术的社会性。
以上说明了设计艺术界面存在的特征因素,说明在理性与非理性上都存在明确、合理、有规则、有根据的认识方法与手段。
成功的作品都是完善地处理了这三个界面的结晶。如贝聿铭设计的卢浮宫扩建工程,功能性处理得很好,没有屈从于形式而损害功能;但同时又通过新材料及形式反映新的时代性特征及美学倾向,这是环境性界面处理的典范;人们观看卢浮宫,不是回到古代,而是以新的价值观去重新审视、欣赏,它的三角形外观符合了人们的心理期望,这是情感性界面处理的极致。
五、设计界面的运用原则
1)合理性原则,即保证在系统设计基础上的合理与明确。
任何的设计都既要有定性也要有定量的分析,是理性与感性思维相结合。努力减少非理性因素,而以定量优化、提高为基础。设计不应人云亦云,一定要在正确、系统的事实和数据的基础上,进行严密地理论分析,能以理服人、以情感人。
2)动态性原则,即要有四维空间或五维空间的运作观念。一件作品不仅是二维的平面或三绝的立体,也要有时间与空间的变换,情感与思维认识的演变等多维因素。
3)多样化原则,即设计因素多样化考虑。当前越来越多的专业调查人员与公司出现,为设计带来丰富的资料和依据。但是,如何获取有效信息,如何分析设计信息实际上是一个要有创造性思维与方法的过程体系。
4)交互性原则,即界面设计强调交互过程。一方面是物的信息传达,另一方面是人的接受与反馈,对任何物的信息都能动地认识与把握。
5)共通性原则,即把握三类界面的协调统一,功能、情感、环境不能孤立而存在。
六、设计界面的应用方法
设计界面所包含的因素是极为广泛的,但在运用中却只能有侧重、有强调的把握。设计因素虽多,但它仍是一个不可分割的整体。它的结果是物化的形,但这个形却是代表了时代、民族等方面的意识,并最终反映出人的“美”的心理活动。
设计界面的运用,核心是设计分析。在一些国际性的大公司,如索尼、松下、柯尼卡等,都有许多的成功案例可为借鉴。如柯尼卡公司设计其相机时,首先不是去绘制“美”的形和考虑技术的进步,而是进行对象人的日常行为分析,作出故事版(STORY)。它先假定对象人的年龄为35岁,名:xxx,从而分析他的家庭、喜好与憎恶,分析他的日常行为,进而考察其人在什么场合需要僚机,从而为设计提供概念(CONCEPT)与目标(TARGET),进行设计。经过分析,设计师有了明确的概念与目标,并随信息的交互产生了创造力。
①缺乏足够科学正确的现代预算管理工作意识,对于全面预算管理工作的认识不足以及不知道如何将全面预算管理真正应用于实际成为阻碍全面预算管理工作有序开展的一大阻力。②在机构建设方面也相对欠缺,没有一个科学严密的管理机构,各项管理工作也相对散乱不成体系,对于预算执行过程中遇到的问题也无法在第一时间进行有效沟通与对策制定,从而让全面预算管理工作的推进举步维艰。③在全面预算的具体工作方面以及监督约束方面的建设力度也相对较弱,影响了全面预算管理工作的健康开展。
二、推行全面预算管理的措施
(一)树立科学严谨的现代管理意识
预算管理不是一个新鲜名词,基于制定有效计划确保资金得到更为有效利用的预算管理应该是与现代社会共同形成与发展的。但是预算管理工作并不是一沉不变的,甚至可以说如果一直固守传统和陈旧的预算管理工作意识及方法不仅无法确保管理工作能够体现自身价值,甚至还会给机构运作造成严重阻碍。所以我们在推行全面预算管理模式之前首先就要树立起适应全面预算管理工作有序开展的科学严谨的现代预算管理意识。所以现代预算管理意识是要将预算管理工作从财务管理的一个分支中划分出来,要重视预算管理在机构运作过程中的全程监控及深层次监控,将过去那种事前预算事后决算的简单被动管理模式转化为全面管理、全部门管理的新型管理模式,这样才能够化被动为主动,切实发挥现代预算管理工作在机构发展决策、全面管理工作中的突出作用。而这对于具有部门庞杂、人员众多、资金需求量大的医院来说,更为重要。在明确预算管理工作重要性以及全面预算基本概念的同时,还要加强全面预算相关知识的学习与掌握,不仅要加强具体预算管理人员的学习力度,对于医院最高管理层、领导者来说相关学习也是非常必要的,只有这样才能够真正把全面预算管理的科学理念应用于实际工作的引导与控制当中,才能够切实落实全面预算管理的理念与精神,才能够为全面预算管理工作的有序开展营造一个良好和谐的内部环境。
(二)加强管理机构建设
想要切实加强医院的全面预算管理工作就必须建立专门化的管理机构。全面预算管理机构的工作不仅仅是进行预算的编制与后续管理,更为重要的是要针对预算执行过程中的相关问题进行及时有效的讨论研究,寻找解决问题的方法和途径。全面预算管理机构应该由院长牵头并作为最高负责人,同时在吸纳优秀预算编制及管理人才的同时,还要加强与各科室、部门主要负责人的联络与交流,确保预算编制工作能够切合医院及各科室、部门的实际需要,这样才能够确保预算编制的科学性、合理性以及后续执行的有效性。在机构运作的权利与义务方面也要进行有效界定,一方面要确保机构运作的相对独立避免遭受其他部门及科室的利益侵扰,另一方面也要加强与其他科室及部门的有效沟通,争取更多的认同与配合,从而确保管理工作的有序开展。
(三)加强全面预算相关制度的建设
全面预算管理不仅仅应该将工作的重点放在直接产生经济效益和成本支出的医疗部门、药品部门及住院部等。同时还要加强对日常办公、后勤保障、安保防卫等各个方面的预算管理覆盖。因此加强全面预算管理制度建设不仅仅只是针对预算这一个点来开展,同时还要加强其他部分的制度建设。如加强药品、医疗耗材采购制度建设,大宗常规物品采用集中采购模式,昂贵医疗设备及大型固定资产采用招投标形式,一方面大力降低采购成本,另一方面也能够有效避免采购人员与供应商之间的暗箱操作。在固定资产管理方面要加强对固定资产的建档及各环节的跟踪记录,从购置、管理到使用以及使用成效和经济价值是否得到有效体现等都要进行详细记录,确保固定资产得到最为有效的合理使用。在后勤保障制度建设方面,应该利用服务外包的形式一方面转嫁成本支出,另一方面让医院享受到更好更专业的优质服务。总之,只有将这些相关制度都进行有效的建设与加强,才能够确保全面预算管理制度体系的有效建立,实现全面预算管理工作的质量提升。
(四)加强全面预算具体工作力度
在相关制度建设紧锣密鼓展开的同时,全面预算管理工作的具体环节也要进一步加强。首先要加强预算编制的合理性与科学性,要以医院当前发展及未来发展为基础进行零基础预算编制方法,这样不仅能够确保预算编制能够更加适应医院的自身发展,同时也能够最大限度确保有效预算资金得到更加合理的利用,不过零基础预算编制方法较传统编制方法来说对预算编制人员提出了更高的要求,所以医院也应该大力加强预算编制人员的素质提升,从而有效发挥零基础预算编制的优越作用。
(五)加强监督约束机制建设