时间：2023-03-16 16:30:31
序论：在您撰写园艺技术毕业论文时，参考他人的优秀作品可以开阔视野，小编为您整理的7篇范文，希望这些建议能够激发您的创作热情，引导您走向新的创作高度。
关键词： 民办院校艺术设计类本科生 毕业论文 指导方法
毕业论文与毕业设计是每个艺术设计类毕业生的必经之路，也是他们这四年来设计学习生涯的一个总结。对于民办院校艺术设计类本科生这一特殊群体来说，论文与设计往往使他们绞尽脑汁，烦恼不已。那么，艺术设计系的教师如何指引他们交上满意的答卷，为四年的学习画上一个完美的句号呢？我结合实践教学经验作出探索，旨在找出适合民办院校艺术设计类本科生的论文指导方法。
一、民办院校艺术设计类毕业论文现状及存在的问题
针对民办综合性院校艺术设计专业的特殊性，通过实际教学指导实践，我总结出了民办综合性院校艺术设计类的毕业生在论文方面存在着以下种种问题。
1.有一小部分学生重设计而轻论文。
这与许多学生头脑中存在着重设计轻论文的观念有关，平时忽视基础理论知识的学习，认为论文无关紧要，只要设计能过就行了，有的甚至认为自己是设计师，不屑于将自己的设计理念、构思过程用文字表达出来，认为艺术是只可意会不可言传的。有的学生不按规定的时间完成初稿，对指导老师的修改意见不予以理会，从而使毕业论文的质量不高。
2.大部分学生文化底子弱、写作功底差。
大部分艺术设计类毕业生对于论文有心无力。艺术设计专业学生在高考中属于艺术类考生，总体文化考分普遍偏低，而入学后，大部分时间都侧重专业技能学习，对《艺术概论》、《中外设计史》等专业文化课程普遍学习热情不高。这样的学习态度导致毕业论文写作理论功底较差。如有一学生论文题为《浅谈中外卡通发展史》的论文，首先这个选题就有假、大、空的潜在问题，中外卡通发展史本身已经是一门历史，历史是已经发生过的事实，这些事实是一些真实性的记录，而不是谈出来的，这是假。而大呢，中外，包括中国和国外，而国外包括各个大陆上的国家，卡通包括卡通人物、场景、剧本等，题目选题范围太大，自然就难以写得详细，从而产生了空的问题。
大部分学生写作基本功底差，语言表达不清晰，结果论文颠三倒四、牛头不对马嘴，连自己都看不明白。对自己所要论述的观点不能从几个方面分清条理来论述，也分不清主次。如谈“古代龙凤纹在现代包装设计中的运用”，重点应在“运用”上做文章，但学生却用大半篇幅来解释什么是“龙凤纹”、“龙凤纹的由来和历史”，等等，而对龙凤纹究竟如何在现代包装设计中“运用”却聊聊数字，草草结束，还没说到重点就没有下文了。
二、民办院校艺术设计类论文指导探索
针对民办综合性院校艺术设计专业的特殊性，通过实际教学指导实践，我进行了一系列的教学改革和探索，总结出以下几点。
1.端正学生的写作态度，提高对毕业论文重要性的认识。
这一点对艺术设计类毕业生来说尤其重要。应该在平时的教学工作中端正学生对毕业论文无所谓这一错误认识，让他们了解到毕业论文质量如何会影响整个毕业设计过程。
2.加强写作训练。
可以结合专业课学习，进行针对性的小论文，重点在于寻找相关资料和建立个人论点，对论文字数和规范性要求不高，但应符合论文的基本格式。以包装设计课程为例，学生独立确定主题、选择材料、制作1―2套包装成品；以论文形式完成相应的课程报告。具体报告可能包括“设计背景、设计构想、设计形式、材料应用、后期问题、市场定位等”。通过应用和分析促进学生对设计基本知识的综合理解，能够用更理性和研究性的方式对待设计，对于学生独立参加各种比赛、毕业实习和毕业设计的顺利完成相当有益。另外，文献检索对于培养学生的自学能力和查找学术资料非常重要，因而在二三年级阶段有必要开设文献检索课程。
3.实行理论与实践现结合的模式。
为了提高毕业论文质量，让论文内容更充实，同时也是为了提高毕业生综合能力和毕业设计的质量，应当实行理论结合实践的操作模式，即学生在完成毕业设计的同时，还要完成与设计紧密结合、息息相关的毕业论文的写作。这种模式要求学生在论文中大篇幅是对自己设计的一个阐述，相当于一个完整版的设计说明。这个设计说明字数要求在3000字以上，其他格式及具体要求与普通本科论文要求相同。这种模式通过对作品的创作过程、构思和材料等方面进行阐述，形成论文，由于都是自身亲身经历过的事情，因此说明详尽、到位，能够很好地阐释设计思想，不仅可以弥补毕业论文无话可说，毕业设计说不出口的缺陷，而且可以有效地避免抄袭现象，提高毕业生论文与设计质量。
4.加强指导环节。
在论文的写作过程中，老师的指导十分重要，只有在论文写作的各个阶段及时给予学生针对性的指导，学生在写作时才能避免走弯路。如：选题时要指导学生选择自己感兴趣的题目，要大小合适，便于操作；修改文章时主要从调整结构、充实内容、修改文字等方面进行。
总之，民办综合性院校的艺术设计专业有其特殊性，也正是因为这种特殊性，作为艺术设计系的教师，我们应当因材施教，针对其特殊性制订特殊的指导方法。毕业论文与创作的指导不是一成不变、完全一致的，每个高校需要不断地改革、尝试、总结，找到一条适合自己的操作管理模式。
参考文献：
［1］王苏凤，王兴亮.综合性大学艺术设计教育的创新思想与实践［J］.中国电力教育，2010.
［2］田蓉辉.艺术设计专业毕业论文写作教学的思考［J］.大众文艺，2010，（08）.
高职院校艺术类专业毕业设计可以培养学生分析问题、解决问题的能力，强化其使用设计软件，熟悉设计与制作的一般流程，使之初步具备与客户沟通和协调的能力，提高学生的职业技能。当前，毕业设计选题价值较低是高职院校艺术类专业毕业设计存在的一个突出问题。受限于指导教师承接的社会设计项目少、种类单一等因素，目前高职院校艺术类专业的毕业设计难以为毕业生提供合理的“项目库”，导致多数高职院校艺术类专业学生的毕业设计选题大多是与实际生活脱节的虚拟课题，“真题真做”或“真题实做”少之又少，毕业设计流于形式与表面，难以深入开展。这与高职院校一贯秉持的“以市场为导向，以就业为宗旨”的教学理念相背离。除此之外，在评价方面，高职院校艺术类专业毕业设计也存在很大问题。许多学校的毕业设计评价时仅由专业教师自行承担，缺乏引入设计公司社会性评价的环节;同时，答辩环节缺乏必要的淘汰，造成考核和评价形式大于内容以及企业和社会参与评价少的问题。
二、基于创业理念下艺术设计类专业毕业设计的教学改革
(一)鼓励学生自主选题
基于创业理念的毕业设计实施的第一步，就是让学生自己走向市场，设计选题。毕业设计项目或是来源于学生与同学的交流，或是来自于网络的项目外包，不论是哪一种，其真实性必须得到保证。以近几年装潢艺术设计专业的毕业设计项目而言，大致有视觉识别系统、宣传册、房地产公司楼书、包装设计、企业网页设计等几大类。毕业设计的自主选题虽然是带有学生个人偏好的一次主观选择，但项目是基于典型工作任务的真实设计，因此，能够使学生获得设计过程的完整训练。学生的选题大多比较贴近本人的职业期望，能够训练学生掌握相关设计职业岗位或岗位群中的基本能力与关键能力。导师应在尊重学生自主选择的前提下，使课题类型多样化，最大程度地发挥学生各自的潜能。学生在启动带有独立工作性质的选题中，自然也会根据个人的实际能力，选择深度、广度和难度适当的项目进行毕业设计。而作为毕业设计实施的管理者，学校专业教研室需要客观评估学生的选题，比如，判断学生自主选择的项目是否具有典型性，其训练是否具有实效性与可行性等。
(二)让学生与客户充分沟通，明确设计任务
学校在强调毕业设计“真题真做”或“真题实做”的前提下，应积极开展虚拟创业。市场上的项目大多是有条件的限定性设计，比如，针对平面设计、广告设计等选题，学生在进行毕业设计时，必须了解消费对象、产品、媒体特定、制作工艺等要素;针对有关室内设计方面的选题，则必须详细了解客户意愿、工程预算、施工组织、施工工艺、施工材料等。艺术设计创业的成功离不开客户资源，一个设计师只有拥有了一定数量的固定客户，才能够被市场认可。有创意的设计并不一定适应于市场的竞争，这其中涉及到设计营销与管理的重要性。如何让设计达到预期的市场效应，首先就要对所涉及到的市场进行分析，找到最恰当的目标消费群，进行市场定位，然后确定项目的核心。一切设计行为都围绕着核心概念展开，这样才能使设计不偏离客户的想法。学生在毕业设计的前期，需要深入市场进行调研，积累有关市场信息和工艺方面的资料，在与客户就设计风格、造价成本、媒介材料等设计问题进行交流时，面对客户的质疑，应适度坚持自己的意见，不应完全被客户牵着鼻子走，要用创意引导并说服客户，使客户认同自己的设计作品。
(三)制定科学的评价标准
学生毕业设计的成绩评定，习见的做法是由指导教师和答辩委员会的评分组成，两部分的比例各占50%，从本质上来说，这属于“校内循环”。对于以创业理念为导向的艺术设计类专业毕业设计而言，答辩小组的成绩评价可以做弱化处理，而将社会(或客户)对学生个人设计得失的评价放在重要位置。具体内容包括:设计理念是否合适，功能设计是否符合业主需要，技术措施是否合理，哪些部分还需要改进，界面设计是否悦目，植物种植设计效果是否美观，家具与陈设选择是否得当，风格采用是否合适，氛围营造是否到位，如何平衡个人设计理念与业主决策之间的矛盾，施工效果如何，采用何种材料和施工工艺完成设计等等。在整个设计实施和现场跟踪的过程中，学生可以采用摄影或工作笔记等方式进行记录、总结。基于创业理念下的毕业设计教学改革，对毕业设计教学与质量管理的整体效能要求更高。同时，通过分析个人与社会需求两者之间的差距，可以使毕业设计教学实施与评价更加多元开放，实现毕业设计教学系统中目标、实施、反馈、控制子系统的协调统一。
三、结语
姓名： 专业： 所属系别：
学号 指导教师姓名 职 称：
开题报告时间： 年 月 日
论 文 题 目 ：小型医院业务管理系统设计
1、拟选课题国内、外的研究动态、水平、存在问题，与本人实习、社会实践、调研的关系，并附主要参考文献：
医院的医疗水平和服务质量一直是国内外关注的焦点，仅靠增加基础设施投入和脱离信息化的管理方法的改进，是不能从根本上提高医院的工作效率、服务质量和管理水平的。医院业务管理系统的目的就是减轻业务劳动强度，减少了差错，科学管理药品，节省人力，提高医院的财、物管理水平，增加经济效益，改善患者的就医环境，方便患者就医和查询，提高医院的服务效率和服务质量，提高医院的医疗质量和管理水平。所以，一个现代化的适应社会发展需要的医院，除了具备一流的医疗队伍、一流的服务设施之外，还应具备一流的业务管理系统。
医院业务管理系统不仅能提高医务人员的工作效率和医疗水平，而且能提高医院的服务质量。因此，医院对业务管理系统有着强烈的需求。本文介绍了医院出入院处、病区、药房、药库的业务流程，在整体分析医院各部门以及部门之间的实际工作业务的基础之上，结合管理系统开发的理念，用VB 6.0作为前端开发工具，开发了医院业务管理系统。目的就是利用计算机软硬件技术、 网络通讯技术等现代化手段，对医院及其所属各部门的业务进行综合管理。从而为医院的整体运行提供全面的、自动化服务的业务信息系统。全文通过对业务流程的分析以及对系统的模块设计、实体-联系图(E-R图)设计、关系模式设计、数据库设计、代码设计、人机界面设计等，详细地阐明了本系统开发的目的、过程及预期效果。
业务管理系统是一门集管理科学、信息科学、系统科学及计算机科学为一体的综合性学科，研究的是管理活动的全过程，以便有效的管理医院。
参考文献
[1]张莉 王强 赵文方 董莉 《SQL Server 数据库原理及应用教程》清华大学出版社,2002
[2] 萨师煊、王珊.数据库系统概论（第三版）.北京：高等教育出版社,2000
[3] 张海藩.软件工程导论（第四版）.北京：清华大学出版社,2003
[4] 催五子、于宁。界面设计与Visual Bbasic.北京：清华大学出版社,2004
2、课题拟解决的主要问题，在理论和应用方面的意义，完成课题的条件（包括实习单位情况）和设计（论文）的主要内容：
意义：1、为病人提供更好更快、更快的服务，提高医院在医疗市场的竞争力以及吸引更多的病人到本医院就医；
2、人力工资昂贵，迫使医院采用计算机以提高劳动效率；
功能：1、门诊挂号：为病人提供就医卡方便病人；
2、住院病人管理系统：是医院可以随时了解病人情况；
3、药房管理系统：提高了药品管理的质量，和工作效率；
4、门诊医生工作站、住院费用的管理、病历管理系统、以及外部接口等。
3、指导教师对学生选题报告的评语：
指导教师签字： 年 月 日
4、选题报告会评议组意见：
组长（签字）： 年 月 日
5、学院审查意见：
关键词：毕业论文；质量；问题；提高
中图分类号：G642.0 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2013）34-0176-02
毕业论文（设计）是本科教育中最重要的实践性教学，作为培养方案的最后一个环节，它既是对学生大学四年学习的全方位检验与考核，也是培养学生分析解决问题和独立工作能力的综合平台。因此，这个环节的实施可为学生走向工作岗位或进入研究生阶段学习奠定基础。但目前本科生毕业设计工作中存在着一些问题，影响了毕业设计综合教育功能的发挥。本文在分析园艺专业本科毕业设计中存在的主要问题及其形成原因的基础上，根据园艺专业的特点，提出了一些提高毕业论文质量的建议。
一、毕业论文中主要存在的质量问题
对当前有关理论前沿或实际生产中的热点、焦点问题关注不够，缺乏创新意识和创新思维，没有独到见解，低水平重复较多。论文对问题的分析不够深刻，缺乏一定学术价值，针对性不强。毕业论文缺少历史性回顾和综述，对本领域了解深度不够，导致盲目推理，尽管有些选题来源于生产实践，但在毕业论文未能作系统设计，也未进行针对性实验，未形成自己的观点。
1.缺乏一定的学术价值，应用价值较少。有学者认为，27%的毕业论文选题来自实践，但只是单纯地堆放基本理论和数据，分析和解决问题的思路狭窄，综合运用知识能力较差；34%的毕业论文缺少历史性回顾和综述，对本领域了解深度不够，导致在文章中盲目推理，选题虽来源于生产实践，但未进行针对性实验，难以形成自己的观点。调查显示，本科毕业论文中大量引用和编辑别人的观点，缺乏学生独立的见解：有61.3%学生的毕业论文是对别人的文章进行裁剪并融入自己的观点，有7.9%学生的毕业论文完全是通过计算机裁剪重组形成的，只有30.8%学生的毕业论文是在实地调研基础上撰写的，阐述的是自己的观点。在这些学生的毕业论文中，有些观点是通过学生一定的积累所形成，也有一些是在实地调查研究的基础上形成的，但其它69.2%的学生的毕业论文观点只能是别人研究的堆砌，或者是完全抄袭别人的观点，这些论文只是原有观点的简单重复，它们的学术价值和实用价值就可想而知。
2.毕业论文撰写不规范。在以往关于毕业论文质量的探讨中偏重于设计选题和课题实施方案的制定与实施，而对论文的撰写过程重视不足，有一些毕业学生在论文答辩时，论文的撰写还达不到学校规定的要求。主要体现在：文献查阅得不够全面；数据处理不科学；结论不能体现题目的创新性；格式不规范。产生这一问题的原因主要有两个。其一，指导教师对毕业论文毕业论文审核不严格，甚至有些指导教师对学校制定的论文撰写规范也不清楚。其二，学生在论文撰写过程中不够主动，科研论文写作知识匮乏，过度依赖指导教师。
二、园艺专业毕业设计教学中存在的问题
1.学生对毕业设计的重视程度不够。园艺专业的特点决定了毕业论文的完成具有季节性和时间长的特点，这使毕业设计的进行在时间上与就业或考研有一定的冲突。而且，由于就业压力的增大，大四毕业生将大部分的精力都投入到了找工作和各类资格考试中，有的学生甚至牺牲毕业设计的时间去学习外语。在论文撰写期间一些同学要么辗转各地寻找工作，要么忙于研究生面试和复试。在这种情况下，学生不可能完成高质量的毕业论文。
2.指导教师指导工作不够到位。学生在选择指导教师时，倾向于经验丰富、威望高的老教师，这些高水平教师的科研任务往往也比较重，如加上过重的毕业生论文指导工作，随着毕业生数量的不断增加，会出现部分教师对毕业设计工作投入的精力不足的情况。而与老教师相比，青年教师虽然可以投入更多的精力，但由于缺少科研和教学的经历，对毕业论文的指导质量也不高。
三、提高毕业设计质量的几点建议
1.关于毕业设计选题时期。为了解决园艺专业毕业设计与就业相冲突的问题，可组织学生提前进入毕业设计，在大二下学期就组织选题，为学生介绍指导教师及各指导教师的科研方向。让学生根据自己感兴趣的课题进行资料搜集及文献阅读。使学生利用学习之余做毕业设计的准备工作，例如，查阅资料、制定实施方案、做实验准备等，甚至在可能的情况下进行一些实验。
2.关于教师的指导。毕业设计是一项重要的育人工作，应特别注意加强教师的职业道德和人格修养，选择责任心强的教师作为指导教师。对于教师的指导，首先是课题的选择，要有助于学生掌握本专业的基本功，巩固、拓宽和综合运用在学习中获得的知识。同时，选题与行业发展、学生出口相结合。高等教育的目的就是为社会塑造高水平的劳动者，而绝大多数学生学习的最终目的是为了择业，所以，毕业设计题目的选择必须与行业技术、市场经济的发展相结合，能够为学生适应社会、适应工作创造条件。本科毕业生的出口基本上就是工作和读研两种选择，对于这两类学生，在确定毕业设计题目时最好能够因材施教：对于就业的同学尽可能选择技术性题目，对于读研的同学尽可能选择技术与理论相结合、研究型的题目。教师在指导过程中要注重启发学生的开创精神，注意理论与实际的结合。还可以和实习的企业及基地合作实行企业高校双导师制。对于科研任务重的教师，可以培养研究生参与教学，以研究生带本科生，在培养了本科生的同时也锻炼了研究生。在激励青年老师参加科研和教学工作，培养其科研教学能力的同时，还可采取老教师与青年教师形成毕业设计指导小组的方式，弥补青年教师经验不足及老教师投入精力有限的缺陷。
3.关于毕业设计教学资源不足的问题。为了解决本科毕业设计教学资源不足的问题，一方面要加大对本科教学经费的投入，另一方面鼓励科研经费充足的教师，将本科生发展为科研力量的一部分，让本科生毕业设计的工作参予到课题研究中去。
4.关于毕业论文的撰写。毕业论文的撰写过程是培养学生研究能力的重要环节。指导教师应多提意见和建议，少给“答案”，注重发挥学生的主动性，但要再关键阶段给予必要的引导和监督。可通过开设“专业文献查阅与论文撰写实训”课程解决学生论文写作能力差的问题，通过该课程的学习，使学生能掌握专业文献查阅的方法和数据处理的技能，熟悉论文撰写的方法及基本要求。
四、结论
本科毕业论文在园艺人才培养中具有不可替代的作用，它是培养大学生实践能力、创新能力和创造精神，提升本科教学水平的一个重要环节。本文提出了避免毕业论文流于形式的一些建议和方法。通过论文的选题、论文时间安排、教师指导、管理等多方面措施，使毕业论文达到园艺专业人才培养的目的。
参考文献：
[1]孙志高.本科毕业设计的选题与质量控制探讨[J].科技创新导报，2009，（13）：137-138.
[2]郑少华，陶珍东，魏财业等.提高本科毕业设计（论文）质量的探讨[J].教书育人（高教论坛），2007，（9）：100-101.
[3]宋文彬.本科毕业设计中素质与能力培养的思考[J].中国科教创新导刊，2009，（16）：113.
这个我们刚写过的。论文的格式很老套、也别写得太有花样。和一般的报告差不多的。这个我们刚写过的。论文的格式很老套、也别写得太有花样。和一般的报告差不多的。应编写成注释说明汇集表予以列出。二、毕业论文（设计）书写格式及装订1、毕业论文（设计）装订为横开本，使用统一的封面，左侧装订。毕业论文（设计）封面的中文题目、英文题目及学生姓名、班级、学号、学院、专业与指导教师等栏目，要用楷书书写，端正、整洁，有条件的学生可以打印输出。2、目录格式（空2行）（3号黑体）目录（3号黑体，居中）引言（或绪论）（或作为正文第1章，4号宋体．吉林大学工商企业管理专业自考学士学位申请有什么具体要求？09年吉林大学自考工商企业管理专业论文申请时间是？我是长春大学的大一新生，想报名吉林大学的工商企业管理二学历！本科毕业论文格式我今年最后一次自考 ，考的是吉大工商企业管理本科证！ 他们要求我们交工商企业管．
自考毕业论文格式范文免费下载
这个东西还是要靠自己来搞海洋生物资源与环境 理论与应用力学电子信息科学与技术 微电子学 光信息科学与技术 信息安全(信息科学技术) 光电子技术科学 材料物理 材料化学 环境科学 生态学资源环境科学 心理学 应用心理学 统计学 系统科学与工程 教育学 教育学 学前教育 特殊教育 教育技术学 小学教育 人文教育 科学教育 华文教育 体育教育 运动训练 社会体育 运动人体科学民族传统体育 运动康复与健康 农艺教育 园艺教育 林木生产教育 特用作物教育/特用动物教育 水产养殖教育 应用生物教育 农业机械教育农业建筑与环境控．辽宁大学自考毕业论文格式？大连水产学院渔业管理专业成人自考毕业论文格式请好心人解答一下：黑龙江大学经济法自考毕业论文格式要求和字数中南大学英语本科自考毕业论文格式自考毕业论文格式又是怎么样的？急用参考
红河学院毕业论文格式
已经有了雅思成绩6.5 想我是红河学院的大四学生，想参加2011年的国考，不知道在哪里看考试大纲红河学院2009年12月份四级准考证前6为是多少？ 谁能告诉我下啊?我忘记准在红河学院培训的时候遇到一个女孩,感觉还不错,彼此联络了一个月,突然间昆明到红河学院怎么．
关键词 植物保护专业；实践教学；改革；实践
中图分类号 G642.0 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2012）03-0037-03
Reformation and Practice of Practice Teaching System for Plant Protection Specialty
LIN Qiao-ling HE Hong * YI Run-hua
（Agricultural College，Guangdong Ocean University，Zhanjiang Guangdong 524088）
Abstract The status reformation and practice of practices teaching system for plant protection specialty in Guangdong Ocean University were introduced，including methods and content，open laboratories，construction of training bases and thesis management，etc. By preliminary trying，the results showed that the teaching reformation promoted students' operative skill and ability to analyze and solve problems，and improved their professional quality，stimulated their learning interest.
Key words plant protection specialty；practice teaching；reform；pratice
植物保护专业是传统植物生产类主干专业之一。该专业主要培养具有植物保护科学的基本理论、基本知识和基本技能，能在农业及其他相关领域从事植物保护工作的技术与设计、推广与开发、经营与管理、教学与科研等工作的应用型、复合型人才。目前，广东海洋大学植物保护专业毕业生多数到农化企业或乡镇农技部门就业，从事农药营销、植保技术服务等工作，还有部分学生读研继续深造。这不仅要求毕业生要具备较宽的基础理论和专业知识，还应具备较强的实践动手操作能力和创新能力。而在以往的实践教学环节中，其课程设置往往是理论课的从属，存在诸多问题，不利于学生实践能力和创新能力的培养。为此，国内不少农业院校都已就植物保护专业实践教学体系进行了探索和改革[1-12]。广东海洋大学积极借鉴其他高校的经验，采取多种措施强化实践教学，以满足植物保护专业实践教学的需要，为培养出高素质人才奠定了基础。
1 教学方法与内容的改革
1.1 教学方法改革
过去实践性教学环节的教学主要是根据课堂学习的内容进行验证性教学，该种教学方式不利于培养学生创新思维、创造和动手能力。为此，广东海洋大学在教学方法上主要采取了以下改革措施：一是采用启发式教学和讨论式教学，在实验教学中充分发挥学生的主体作用，调动学生的积极性和创造性。在上实验课前一周教师提前给学生安排讨论的题目，让学生通过查阅资料、上网搜索等做好准备。在讨论过程中，教师认真倾听，结合学生讨论的实际，做好引导，进行必要的提示、点拨、设疑、答疑等。二是结合病虫害发生的特点实施现场教学。如农业昆虫学与农业植物病理学等实验课上，教师可针对教学内容适时带领学生走出教室，深入田间地头，观察识别病虫，采集病虫害标本，跟随指导解疑。通过此过程，学生身临其境，形象生动地观察认识了以往只在课本和PPT上看到的常见病虫害，也掌握了常见病虫害的发生规律，大大提高了其学习兴趣。三是鼓励学生采集标本，参与教具制作，提高其实践动手能力。广东海洋大学校园周边植被丰富，是一个天然的植物标本贮藏库。根据季节和植物的生长发育周期，组织学生制作成套病虫害标本，不仅可以强化学生的动手操作能力，还能丰富实验室的标本贮藏量，为学生的实验教学增加教学内容，一举两得。
1.2 教学内容改革
植物保护专业许多课程实验都属于验证性内容，如普通昆虫学和普通植物病理学实验内容多是对常见昆虫和病菌的识别与鉴定，以往学生只要按实验指导步骤进行操作就能顺利完成实验，这样学生只能掌握基本的实验操作技能和常规的实验仪器设备使用方法，但缺乏动脑思考、分析问题与解决问题能力的锻炼，使得真正能够合理地设计实验并就实验提出问题和解决办法的学生不多。为改变此弊端，广东海洋大学开展了以下内容的改革：一是在课程实验教学内容和形式上增加了技能性、设计型综合实验。如在普通植物病理学实验项目中增加了植物病原菌分离及其培养基设计这一综合性实验项目，让学生自己采集各种植物病害标本，并根据病原菌的特性，设计、配制培养基，通过比较分析各种培养基对病原菌生长、分离效果的影响，培养学生的创新思维和动手能力。二是在教学计划中增设了技能训练课，以强化学生的专业技能训练。技能训练课包括植物病理学基础、昆虫学基础、植物病害防控、农业害虫防控等四大模块，每个技能训练课20个学时，形成了基本实验操作能力与专业技能、专业技术应用有机结合的实践教学体系。三是实验课与生产实习相结合，生产实习与社会需求相结合。根据农业生产现状和出现的新问题，设计实习的内容。课程的实验课与生产实习结合，使学生在掌握基本操作的前提下，培养学生的创新思维和动手能力。如农业昆虫学实验课与生产实者有机结合在一起，可以帮助学生了解害虫的发生以及生物学特点，进一步提出防治的方法与措施，并在实践实习中加以确认。学生觉得能学以致用，从而激发了其学习兴趣，锻炼了其创新思维和动手能力。
2 开放实验室，推行本科生科研导师制
以往的实验室管理，仪器分散，功能不全，利用率低，相互独立。部分实验室仅供学生上课使用，不对本科生进行开放，不利于培养学生的动手能力。为此，广东海洋大学对实验室进行整改，把教学实验室与科研实验室进行整合，成立大植保实验平台，实验室总面积近1 000 m2，近3年来添置实验仪器设备费用超过300万元。实验室由专人负责，做到人、财、物资源共享，实行全天候开放实验室制度，对本专业学生全面开放。学生可利用课余时间及周末与寒暑假时间自由出入实验室，大大方便了学生做实验。同时推行本科生科研导师制，由指导老师负责本科生科研选题及实验室安全、卫生等问题，避免学生盲目操作。本科生与导师实行双向选择，导师可以挑选学生，学生也可以自由选择理想的导师。导师可以先为学生选择研究主题，通过研究实践，使学生逐步掌握选题的技巧。特别是导师自己有科研课题时，能够让学生尽早参与课题的研究，对锻炼和培养本科生的科研能力是十分必要的。同时，学生随导师进入相应的实验室，与其他研究生一起，协助导师做些教学和科研的辅助工作，增加了其实践机会，增强对其的科研能力和创新能力的培养力度。实践证明，学生对科研导师制反响较大，参与积极性很高，班级学生参与率几乎达到100%。同时广东海洋大学还利用该实验室平台，鼓励学生积极参与广东省和学校组织的大学生科技创新大赛、挑战杯等活动，取得了良好的效果。近年来，已有多名学生获得校级以上创新大赛或挑战杯竞赛奖项，在核心刊物上发表了多篇研究论文。
3 实训基地的建设
实训基地是保证学生实践教学顺利进行的必备条件，是培养学生动手能力、实际操作能力的重要基地，也是直接影响教学质量的重要因素。为确实提高植物保护专业学生的实践能力，广东海洋大学因地制宜在校内外建立了较为完备的实训基地。
3.1 校内实训基地建设
植物保护专业是隶属于广东海洋大学农学院11个涉农的本科专业之一，为搞好该专业的校内实训基地，广东海洋大学充分利用学院已建有的农业生物技术研究所和园艺研究所等条件，并结合学院其他专业如农学、生物技术、园林、园艺等相关专业的校内教学、科研、生产等资源，在校内建立了水稻、甘蔗、果树、蔬菜及热带植物等病虫害观测圃，为相关专业课程从“黑板”教学走向“现场”教学，将书本上抽象的“植物病虫发生与防治”变得具体、生动、形象，为实现理论与生产实践的无缝对接等奠定了坚实基础。同时，该专业还组织学生按作物种类对其病虫害发生情况进行定期或不定期调查，以了解、掌握校内各主要作物病虫害的发生与发展规律，并根据病虫害的发生规律，结合课堂教学内容，对其防治策略与防治方法提出建议，较好地实现了理论知识与生产实际的结合，大大激发了学生学习的积极性和创造性，提高了学生发现问题、分析问题与解决问题的能力。
3.2 校外实训基地建设
校外实训基地建设是理论与实践相结合，提高学生的实际工作能力，锻炼、培养学生的职业技能与职业道德极为重要的一环。在充分利用校内实训基地的同时，广东海洋大学加强了校外实践教学基地的建设。结合当地热带农业特色，广东海洋大学分别建立了南亚所热带植物实习基地、廉江红橙实习基地、徐闻香蕉与蔬菜实习基地、雷州蚕桑实习基地及湖光农场实习基地等多个校外实训基地，不仅提高了专业课程的教学质量，同时也保证了学生生产实习的顺利进行。
4 强化毕业论文（设计）管理与指导
毕业论文（设计）是学生4年所学知识的综合应用，是学生理论水平、操作技能与发现问题、分析问题与解决问题能力及创造性的集中反映，是衡量教学质量与教学水平的重要指标。为提高学生毕业论文质量与水平，结合农科专业高等教育特点，广东海洋大学在学生毕业论文（设计）管理与指导工作中进行了如下改革。一是严把毕业论文选题与内容关。要求学生的毕业论文必须是一人一题，论文是在导师的指导下由学生独立完成的；论文内容必须是学术研究性论文，不仅要有广度，还要有一定的深度和创新性。二是严把指导教师关。要求指导毕业论文的教师必须有课题支持，以鼓励学生参与科学研究，培养学生的创新能力。三是严把毕业论文答辩关。答辩时专业成立毕业论文答辩委员会，对学生毕业论文的选题、内容、格式、独创性等进行全面严格审查，对不合要求的论文一律不准答辩；答辩时要求每人进行独立答辩，由答辩委员根据学生毕业论文的水平、答辩表现等，对每个学生的毕业论文答辩做出客观、公正评价。四是强化了毕业论文的过程管理。要求学生的毕业论文必须有开题报告、中期检查报告、指导教师意见、评阅教师意见等。为保证学生能顺利完成毕业论文的研究工作，广东海洋大学除建立植物保护专业实验室平台、建立全天候开放实验室制度外，在教学安排上也进行了一系列的改革与调整，在学生进入三年级时即开始安排、组织学生进行毕业论文撰写工作，以保证学生有充足的时间开展毕业论文的研究工作，一改过去四年级时才开始进行毕业论文研究工作的状况，这样不仅在时间跨度上可以涵盖农作物一个完整的生长发育期，以保证研究资料的完整性、系统性和可靠性，同时为学生留出充足的时间进行认真思考与总结，确保毕业论文的质量与水平。通过改革，该专业学生毕业论文的选题范围逐步扩大，研究深度得到了进一步的拓展，学生的科研能力和创新意识得到进一步增强，毕业论文的质量和水平得到明显的提高，已有多篇毕业论文在校内外学术期刊上发表。
5 结语
通过对植物保护专业实践教学体系的改革和实践，激发了学生对该专业的学习兴趣，增强了学生的实践能力、自学能力和创新能力，也使学生分析问题、解决问题的能力得到提高；同时，明显提升该专业的教学水平、教学效果、教学质量，逐年提高学生就业率，受到学生和用人单位的充分肯定。但由于植物保护专业涉及面广，又受地域等主客观条件限制，虽然改革取得了一定的成绩，但这只是一个初步的尝试，还需要不断探索和改进，广东海洋大学将不断努力，确保植物保护专业实践教学体系更加完善，为社会培养更多具有较高综合素质、适宜和促进社会经济发展的植物保护专业人才。
6 参考文献
[1] 廖胜刚.创新实践教学：对接高校人才培养模式与就业市场需求[J].当代教育论坛：宏观教育与研究，2005（1）：94-96.
[2] 龚国淑，黄云，张敏，等.新时期植保高素质人才培养浅析[J].四川农业大学学报，2004，22（S1）：29-31.
[3] 郭胜.以就业为导向构建实践性教学体系[J].职业与成人教育，2005（3）：40.
[4] 康涛，卢毅，刘小高.当前综合性院校农科实践教学质量的研究[J].江西农业大学学报：社会科学版，2003，2（1）：89-94.
[5] 贺桂欣，王久兴，齐永顺，等.论创业教育视野下的园艺学专业实践教学体系构建[J].河北科技师范学院学报，2007，21（2）：64-67.
[6] 高必达，余映波，李红玫.植保专业动态应变教学体系的探索[J].高等农业教育，2001（2）：65，84.
[7] 赵明.植物保护专业实验教学改革研究[J].中国科教创新导刊，2009（20）：85.
[8] 郑春龙，邵红艳.以创新实践能力培养为目标的高校实践教学体系的构建与实施[J].中国高教研究，2007（4）：85-86.
[9] 黎东升.农林管理专业实践教学环节改革的必要性与可行性[J].高等农业教育，2001（8）：64-65.
[10] 樊东，王晓云，赵奎军.农科专业多样化人才培养模式的研究[J].高等农业教育，2004（1）：18-21.
生物技术是分子遗传学、生物化学、微生物学等基础学科发展的产物。作为一种高新技术,生物技术在整个科学领域中占据了越来越显著的地位。作为世界新技术革命的重要组成部分,生物技术已经成为人类彻底认识和改造自然界,克服人类自身所面临的人口膨胀、粮食短缺、环境污染、疾病危害、能源资源匮乏等一系列重大问题的有效手段和工具[1]。
目前在黄瓜育种中,广大科研工作者利用生物技术结合常规育种方法,创新了一大批含有优异基因的黄瓜育种材料,培育出多个丰产、优质、多抗品种。生物技术在黄瓜遗传育种上的应用非常广泛,下面介绍在这方面已取得的一些重要进展。
2分子标记技术在黄瓜遗传育种中的应用
2.1黄瓜基因的分子标记
开展基因分子标记研究是进行分子标记辅助选择育种、分离和克隆基因的基础。“十五”期间,我国科研工作者建立了适合黄瓜的RAPD、AFLP和SSR标记的优化反应体系,并对黄瓜的多个基因进行了分子标记。
钱忠英等[2]优化的黄瓜RAPD反应体系为:PCR程序94 ℃预变性3 min,94 ℃变性30 s,37 ℃复性30 s,72 ℃延伸2 min,循环40周,最后72 ℃延伸7 min为佳;模板DNA的适宜浓度为2.5～5 ng/μL,引物浓度为0.6 mol/μL,dNTPs浓度为0.25 mmol/L,Mg2+浓度为1.875 mmol/L。张桂华等[3]建立了适合黄瓜的AFLP反应体系:在50μL酶切连接体系中,取300 ng基因组DNA进行双酶切和接头连接,然后取4μL酶切连接产物进行预扩增,预扩增产物稀释30倍后,采用“2+3”选择性扩增引物组合用于选择性扩增可以得到很好的扩增效果。葛风伟[4]等摸索了适宜黄瓜的SSR反应体系,认为在25Μl PCR反应体系中,Mg2+的最适浓度为0.2 mmol/L;dNTP最适浓度为0.2 mmol/L;反应体系中Taq聚合酶宜加入1U,引物应加入30 ng;DNA最适浓度为5 ng/μL。另外,刘殿林[5]、张正奇[6]、孙敏[7]等也对黄瓜基因组DNA提取方法和RAPD反应体系进行了探索。
基因分子标记方面,陈劲枫等[8]利用RAPD技术获得了黄瓜全雌性特异的片段B111000。娄群峰等[9]筛选得到了与黄瓜全雌性F基因连锁距离为6.7 cM的AFLP标记TG/CAC234,并将该标记转化为SCAR标记SA166。张桂华等[10]找到2个与白粉病抗病相关基因连锁距离为5.56 cM的AFLP标记,目标片段的大小分别为238 bp和236 bp。张素勤等[11]研究并获得了与控制黄瓜霜霉病和白粉病的感病QTLs均紧密连锁的显性AFLP标记:E25M632-103。该标记从分子水平说明黄瓜霜霉病和白粉病的某个感病QTLs是连锁的。丁国华[12]筛选得到与抗霜霉病基因dm连锁不十分密切的CsRGA3标记。在dm和CsRGA3之间还检测到黄瓜白粉病抗病基因pm的存在,显示了dm和pm存在连锁关系。国艳梅[13]筛选到的AFLP标记E4M6和E5M5,分别与黄瓜营养部分苦味基因Bi连锁,距离15.0 cM;和不苦基因bi连锁,距离18.8 cM。顾兴芳等[14]找到了与黄瓜果实苦味基因Bt紧密连锁的两个显性AFLP标记E23M662-101和E25M652-213,与Bt的遗传距离分别为5 cM和4 cM,且位于Bt两侧。Thomas等[15]以WⅡ983G×Strait8的55个F2+代个体和Iudm1×Strait8的90个F2+代为研究群体,从960对RAPD引物产生的135个多态性标记中筛选出5个与黄瓜霜霉病基因(dm)紧密连锁的标记:G14-800、X15-1100、AS5-800、BC519-1100和BC526-1000。
2.2黄瓜遗传图谱的构建与基因定位
1994年,Kennard等[16]以G421×H-19获得的F2+群体为材料,构建了一张总长为766 cM的遗传图谱,该图谱由10个连锁群组成,包含了58个位点标记,2个位点之间的平均距离为(21±8)cM。同时利用种间杂交GY14×PⅡ83967获得F2+群体构建了含有70个位点,10个连锁组群,总长480 cM的连锁图谱。1997年,Serquen等[17]以G421×H219杂交的100个F2+株系为试材利用RAPD技术构建了一个含有80个位点的连锁图谱,包含了77个RAPD标记,3个形态标记,分为9个连锁组群,整合长度628 cM,平均标记间隔7.8 cM。
2000年,Danin-Poleg等[18]以GY14×PⅡ83967为材料,用SSR标记技术构建了黄瓜的遗传图谱,将14个SSR标记定位到8个连锁组群中,整合图谱总长为783.2 cM,并发现其中有9个标记与甜瓜相同。Bradeen等[19]利用Joinmap软件,以G421×H219的杂交后代群体为研究对象,整合出含有10个连锁群,255个标记,总长为538.6 cM的遗传图谱,平均标记间隔为2.3 cM。又以GY14×PⅡ83967为材料,构建了一张包括了15个连锁组群,197个标记,整合图谱长度为450.1 cM的黄瓜遗传图谱。Park等[20]利用对番木瓜环斑病毒(PRSV-W)和南瓜花叶病毒(ZYMV)敏感的“Straight8”和对PRSV-W、ZYMV有抗性的TMG1(TaichungMouGua)的F6代重组自交系(RLs)为材料,构建了包含353个位点,12个连锁组群的连锁图谱。Fazio等[21]采用G421×H219获得的171个RLs和216个F2+单株构建了包含14个SSR标记、24个SCAR标记、27个AFLP标记、62个RAPD标记、1个SNP标记和3个重要形态学标记(雌性,有限生长和小叶),分为7个连锁组群,总长为706 cM的遗传图谱。Young等[22]以黄瓜抗病毒和感病毒的亲本组成的重组自交系进行AFLP、RAPD、RFLP标记,并构建了353个位点的黄瓜图谱。
“十五”期间,我国科研工作者构建了2张黄瓜遗传图谱,其一是张海英等[23]利用黄瓜重组自交系为作图群体,构建的包含9个连锁组群,共有234个分子标记的连锁图谱,其中包括141个AFLP标记、4个SSR标记和89个RAPD标记,覆盖基因组长度727.5 cM,平均图距3.1 cM。应用该图谱对控制黄瓜耐弱光的数量性状基因(QTL)进行了研究,将影响叶面积增长量的5个QTL分别定位在LG1、LG7和LG9连锁群[24]。其二为李效尊等[25]利用F2+代群体,构建的包含77个SRAP标记和79个RAPD标记的遗传图谱,分属4个大的连锁群和5个小的连锁群,总长度1110.0 cM,平均间距为13.7 cM。并将侧枝基因(lb)定位在一个大的连锁群上,其两侧标记是OP-Q5-1和OP-M-2-2,与lb的间距分别是9.3 cM和15.9 cM;将全雌性基因(f)定位在一个小的连锁群上,其两侧标记是OP-Q5-2和BC151,与f的间距分别是13.8 cM和13.6 cM。
2.3分子标记在黄瓜亲缘关系和遗传多样性上的研究
分子标记技术以其准确性高、速度快、周期短而较多地应用于黄瓜种质亲缘关系分析和种质资源多样性检测方面。利用RAPD标记进行研究的报道有:张海英等[26]分析了华北型与欧洲温室型品种的杂交后代的遗传漂移情况,进行了初步的遗传分析以及F2+个体的基因型分析。刘殿林等[27]分析了39份黄瓜材料的遗传差异,不同材料间的遗传距离(D)在0.0642～0.592之间,并根据遗传距离,按UWPGA法进行了聚类分析。夏立新等[28]计算出黄瓜亲本间分子遗传距离,研究了田间园艺性状与分子遗传距离间各种相关曲线的相关系数。陈劲枫等[29]对黄瓜属的22份材料的亲缘关系进行了研究,聚类分析为2群:CS群(黄瓜、西南野黄瓜及野黄瓜)和CM群(甜瓜、菜瓜、野生小黄瓜及非洲角黄瓜)。庄飞云等[30]也将23份材料按亲缘关系聚类为黄瓜、近缘野生种、种间杂交种和甜瓜亚属种4类。李锡香等[31]分析了66份黄瓜种质基因组DNA,将供试种质分为8个组群。另外,利用RAPD标记可以从分子水平上探测黄瓜亲本自交系与其杂种F1代的遗传差异[32]。
AFLP技术也经常用在亲缘关系和遗传多样性研究上面。王志峰等[33]利用AFLP技术对包括80份山东黄瓜地方品种和24份其他地区品种的遗传亲缘关系进行了研究,聚类分析结果显示:山东黄瓜地方品种与日本品种和欧美品种分属不同类群或亚类群,山东地方品种分为8组,各组内生态类型基本一致。AFLP分析计算出15份密刺类黄瓜品种的遗传距离在0.033～0.686之间,聚类分析分为8类,新泰密刺和山东密刺遗传差异较小,与长春密刺遗传差异较大[34]。李锡香等[35]以8对引物对70份不同来源的野生和栽培黄瓜种质基因组DNA进行AFLP分析,将供试种质聚类为3大种群:西双版纳黄瓜组群、印度野生黄瓜组群和栽培黄瓜组群。Zhuang等[36]用RAPD和SSR分析黄瓜野生种、半野生种的亲缘关系,二者的遗传分析结果具有很高的协调性,二者遗传距离的相关系数为0.94。
另外,李俊英等[37]发现在不同黄瓜品种的线粒体中存在类质粒分布的差异,其存在有一定随机性,不同品种中的同一种类质粒间具有同源性。
2.4黄瓜基因的克隆与表达
黄瓜基因克隆有多篇报道。康国斌等[38]克隆得到了在黄瓜冷敏型品种低温锻炼异表达基因的cDN段(ccr18),大小为639 bp。在基因组中以单拷贝或低拷贝形式存在。ccr18基因与黄瓜低温锻炼相关,与拟南芥染色体IIIBAC库中的F14P3基因组序列具有88 %的同源性。白吉刚等[39]扩增出黄瓜生长素结合蛋白基因(ABPl)cDN段,大小约为800 bp,该基因在开花前1 d的子房中表达信号较弱,在授粉后2 d、4 d和6 d的幼果中表达增强。丁国华等[40]利用简并引物从黄瓜基因组DNA中分离得到15条同时具有特征保守域结构的NBS类型抗病基因同源序列(RGA),翻译产物与许多抗病蛋白有较高的同源性。
牛林海[41]克隆了黄瓜HMG(high mobility group proteins)基因,并认为该基因是单拷贝,具有组织特异性表达,在根中表达最强。叶青静[42]测定了黄瓜果实组织中的与细胞分裂相关的精氨酸脱羧酶(ADC)基因cDNA序列(约1.83 kb)、与细胞膨大有关的扩张蛋白基因cDNA序列(约786 bp)以及一条酸性转化酶的cDNA全长序列(约2.25 kb)。李志英[43]获得了正常和“花打顶”黄瓜之间的2个差异片段所在基因的全长cDNA序列,分别定名为CUATP和CuADC。“花打顶”植株中CUATP的表达明显减少,而CuADC表达量增加。梅茜[44]构建了黄瓜幼果的cDNA文库,得到139个表达序列标签(ESTs),其中有97条与已知基因高度相似,36条为低度相似序列,在GenBank中未找到匹配同源序列的ESTs为6个。娄群峰[45]从中国弱雌性黄瓜中克隆出了全长为1024 bp的ACC合酶基因,包含6个开放阅读框,不同生态型黄瓜中ACC合酶基因序列保守性很强。不具有性型特异性,但在植株不同部位表达程度存在明显差异。
2.5黄瓜杂种纯度及品种指纹图谱分析
黄瓜种子纯度鉴定的常规方法是根据田间表现性状进行鉴定,后来发展为利用同工酶的方法,但二者都有一定的缺陷。利用分子标记技术鉴定黄瓜种子纯度,可以在苗期甚至种子阶段进行,高效快速、稳定可靠。克服了传统田间检验要根据植株园艺性状进行而导致的费时、费力等缺点。但相关报道比较少。
王和勇[46]研究表明,黄瓜不同组织器官的DNA对RAPD扩增无影响,均可获得一致的指纹图谱,并建立了种子纯度鉴定的RAPD的反应体系。孙敏[47]等通过RAPD标记鉴定和分析了黄瓜品种真实性,也建立了适宜黄瓜种子纯度鉴定的RAPD指纹图谱。金红等[48]研究了抗除草剂基因在黄瓜杂种纯度快速鉴定上的应用,摸索出田间抗性鉴定和室内种子抗性鉴定的除草剂临界浓度,建立了一套在种子发芽阶段或2片真叶期进行黄瓜杂交种纯度鉴定的新技术。
2.6分子技术鉴定黄瓜病害
王惠哲等[49]以感病组织和健康组织总RNA为模板,进行cDNA合成和PCR扩增,对75份黄瓜病毒病样本进行了检测,结果从感病组织中扩增出与预期的425 bp大小一致的目标片段,而健康组织无此扩增产物;29份材料检测到TMV,检出率达38.67 %。同样的方法,也检测到黄瓜上的西瓜花叶病毒2号(WMV22)[50]。李淑菊等[51]利用RT-PCR对黄瓜病毒毒原种类进行检测。陈洁云等[52]用同样技术明确了ZYMV和CMV是浙江及其周边地区侵染葫芦科植物最主要的病毒种类,夏季CMV普遍发生,ZYMV主要发生在秋季。
3黄瓜组培技术与单倍体和三倍体培养
利用对黄瓜离体组织的培养,通过愈伤组织和胚状体两条途径均可获得再生植株。何晓明等[53]建立了子叶及下胚轴离体培养体系,通过愈伤组织分化出的不定芽获得再生植株。郭德章等[54]将分离纯化的黄瓜子叶原生质体,培养于mKM8p液体培养基中,原生质体可持续分裂至愈伤组织形成。当再生的愈伤组织直径达0.5～1.5 cm时,及时转入改良的MS附加不同生长激素的培养基上诱导分化及再生,结果产生大量体胚并再生成植株。
不少报道对黄瓜组织培养的影响因素做了探讨。侯爱菊等[55]认为外植体类型、基因型及植物生长调节剂对诱导黄瓜直接器官发生有显著影响,子叶节是最佳的外植体类型。杨爱馥等[56]研究认为愈伤组织诱导阶段和胚胎发生阶段分别采用9 %和6 %的蔗糖浓度,可促进体细胞胚胎发生;胚诱导培养基中添加6-BA 0.5 mg/L,以及愈伤组织诱导阶段甘露醇与蔗糖配合使用,可提高体细胞胚胎发生率。梅茜等[57]研究表明,苗龄和ABA是影响子叶分化形成不定芽的显著因素;加入适量的AgNO3可改善黄瓜愈伤组织的质地、促进芽的形成。与曹利仙等[58]试验结果相同。郭德章等[54]认为Ca2+浓度对黄瓜原生质体的稳定和细胞分裂有重要影响。李云等[59]研究后认为赤霉素处理离体黄瓜子叶不能诱导花芽分化,萘乙酸的促进作用不明显,激动素KT1.0诱导花芽分化的频率最高。但周俊辉等[60]认为l/2 MS培养基中附加0.10 mg/L 6-BA能显著提高离体黄瓜子叶的开花率,White培养基中附加2.00 mg/L的KT开花率也有明显提高。相同浓度的L-丙氨酸和L-酪氨酸均明显促进黄瓜子叶开花,而甘氨酸对黄瓜子叶开花则有一定的抑制。
在黄瓜单倍体和多倍体培养方面,杜胜利等[61]在国内首次建立了一整套通过未受房离体培养产生黄瓜单倍体植株的技术体系,再生频率达25 %。雷春等[62]通过射线辐射花粉授粉并结合胚培养从3个基因型中获得了单倍体植株。陈劲枫等[63]研究了异源三倍体黄瓜的离体繁殖的培养基配方最佳的不定芽诱导培养基为:MS + 6-BA 2.2 mg/L和MS + 3.0 mg/L KT + 0.2 mg/L NAA,然后丛生芽在MS + 0.2 mg/L 6-BA的培养基上伸长大约10 d后取整齐一致的芽在1/2 MS + 0.2 mg/L 6-BA培养基上生根。
4黄瓜遗传转化体系建立及基因工程改良
基因工程技术是现代生物技术改良作物品种的关键技术之一,在农业生产中有着广泛的应用前景。可应用于黄瓜上的转基因方法有农杆菌介导法、基因枪法、花粉管通道法和电激法等,目前以农杆菌介导法为主要方法。近几年来,广大科研工作者研究和建立了黄瓜高效遗传转化体系,并通过农杆菌介导将CMV-CP、CBF3、Cor15A、Chi、Glu、CTB/CS3、RS等基因导入黄瓜基因组。
陈峥等[64]的研究表明,在共培养的菌液中添加乙酰丁香酮,明显提高外植体的愈伤组织诱导率;延长农杆菌与外植体的共浸染时间至40 min,外植体的存活率和出芽率显著提高。姚春娜等[65]试验表明,超声波处理可以明显提高农杆菌对外植体的转化频率。侯爱菊等[66]建立了一套黄瓜遗传转化体系,适宜的选择压力为卡那霉素30 mg/L。金红等[67]也对影响遗传转化体系的因素进行了摸索。于静[68]、孙兰英[69]、赵隽等[70]均认为子叶节是黄瓜遗传转化体系的最佳外植体,最适宜的芽诱导培养基为MS + 6-BA 0.5 mg/L;子叶节预培养1～2 d,在添加6-BA 0.5 mg/L、乙酰丁香酮100μmo1/L,pH 5.2的MS培养基上进行培养,遗传转化效率最高。利用TDZ从子叶节上诱导出再生芽,效果优于BA。
金红等[67]将抗除草剂基因bar导入到黄瓜子叶中,获得落地转化株系。邓小燕等[71]构建成植物表达载体Pbinp-35S-CBF3。通过农杆菌介导转化黄瓜子叶,获得了具有卡那霉素抗性的黄瓜再生植株。张兴国[72]等也将冷cbf3基因和corl5a抗寒基因导入黄瓜基因组,创制出耐寒黄瓜新材料。白吉刚等[73,74]将拟南芥生长素结合蛋白基因转化黄瓜,获得的转基因植株单性结实能力增强。通过黄瓜离体子叶不定芽再生体系,陈丽梅[75]和林建丽[76]已分别将荧光素基因(luc)、ATT1基因和花生白黎芦醇合酶(RS)基因导入黄瓜,获得了阳性转基因植株。柏锡[77]获得了转组织型纤溶酶原激活剂基因的黄瓜植株。张国广[78]将来源于菜豆的几丁质酶(Chi)基因和克隆自烟草的β-1,3-葡聚糖酶(Glu)基因导入3个基因型的黄瓜基因组中。侯爱菊[66]、孙兰英[69]和杨成德[79]也利用农杆菌介导法将菜豆几丁质酶基因导入黄瓜。
5存在问题及展望
黄瓜有7对染色体,染色体组总长度750～1 000 cM,高饱和的分子连锁图应具有7个连锁群。目前构建的遗传图谱相对不饱和,整合后的连锁图谱虽然密度增加,但是不能覆盖整个基因组。被定位到图谱上的分子标记不多,与重要性状紧密连锁的标记就更少。因此,仍需对黄瓜分子标记进行研究,找到与性状紧密连锁的标记,为分子标记辅助育种和基因的定位克隆奠定基础。黄瓜组织培养以二倍体的研究居多,单倍体和多倍体的研究较少,黄瓜单倍体组织培养的技术在国内仍未成熟,黄瓜转基因技术也还停留在研究阶段,与实际应用还有相当差距,今后尚需进一步研究。
参考文献
[1] 姜健.生物技术在农业发展中的应用[J].农业与技术,1999,19(3):8-11.
[2] 钱忠英,蔡润,潘俊松,等.黄瓜RAPD体系的优化与应用[J].上海交通大学学报(农业科学版),2003,21(3):208-213.
[3] 张桂华,杜胜利,鞠秀芝,等.黄瓜AFLP反应体系的建立[J].华北农学报,2004,19(2):10-12.
[4] 葛风伟,张海英,陈青君,等.黄瓜SSR反应体系的建立[J].华北农学报,2004,19(2):5-9.
[5] 刘殿林,杨瑞环,哈玉洁,等.黄瓜基因组DNA提取与RAPD分析[J].华北农学报,2002,17(4):9-12.
[6] 张正奇,邹敏芬,熊劲芳,等.黄瓜DNA的提取研究[J].湖南大学学报(自然科学版),2003,30(6):31-33.
[7] 孙敏,乔爱民,王和勇,等.黄瓜DNA提取及其RAPD-PCR反应体系的优化[J].种子,2004,23(6):9-14.
[8] 陈劲枫,娄群峰,余纪柱,等.黄瓜性别基因连锁的分子标记筛选[J].上海农业学报,2003,19(4):11-14.
[9] 娄群峰,陈劲枫,MollyJahn,等.黄瓜全雌性基因连锁的AFLP和SCAR分子标记[J].园艺学报,2005,32(2):256-261.
[10] 张桂华,杜胜利,王鸣,等.与黄瓜抗白粉病相关基因连锁的AFLP标记的获得[J].园艺学报,2004,31(2):189-192.
[11] 张素勤.黄瓜霜霉病和白粉病抗性遗传机制及其分子标记研究(博士毕业论文).2005.
[12] 丁国华.黄瓜抗病基因同源序列的克隆及其对霜霉病抗病基因标记的研究(博士毕业论文).2004.
[13] 国艳梅.黄瓜苦味遗传规律研究及AFLP分子标记(硕士毕业论文).2003.
[14] 顾兴芳,张素勤,张圣平,等.黄瓜果实苦味Bt基因的AFLP分子标记[J].园艺学报,2006,33(1):140-142.
[15] Thomas H,Staub J E,Claude Thomas.Linkage of random amplified polymorphic DNA marker stodowny mildew resistance in cucumber (CucumissativusL.)[J].Euphytica,2000,115:105-113.
[16] Kennard W K,Poetter K,DIjkhuIzen A,et al.Linkage samong RFLP,RAPD,isozyme,disease-resistance and morphological marker sinnarrow and wide crosses of cucumber[J].TheorAppl.Genet,1994,89:42-48.2.
[17] Serquen F C,Bacher J,Staub J E.Mapping and QTL analysis of horticultural trait sinanarrow cross in cucumber(CucumissativusL.)using random 2 amplified polymorphic DNA markers[J].MolecularBreeding,1997,3:257-268.
[18] Danin-Poleg Y,Reisn,Baudracco-Arnas S.Simples equecerepeats in Cucumism apping and mapmerging[J].Genome,2000,43:963-974.
[19] Bradeen J E,Staub C,Wye C.Toward sanexpande dandinte grated linkagemap of cucumber(CucumissativusL.)[J].Genome,2001,44:111-119.
[20] Park Y H,Swnsoy S,Wye C,etal.Agenetic map of cucumber composed of RAPDs,RFLPs,AFLPs, and lociconditioning resistance topapayaring spot and zucchini yellow mosaic viruses[J].Genome,2000,43(6):1003-1010.
[21] Fazd G,Staub J E,Srevensm R.Genetic mapping and QTL analysis of horticultural traits in cucumber(CucumissativusL.)[J].Theor.Appl.Genet.,2003,107(5):864-874.
[22] Young H P,Suat S,Cispin W,et al.Agenetic map of cucumber composed of RAPDs,RFLPs,AFLPs and locicondition[J].Genome,2000,43:1003-1010.
[23] 张海英,葛风伟,王永健,等.黄瓜分子遗传图谱的构建[J].园艺学报,2004,31(5):617-622.
[24] 张海英,陈青君,王永健,等.黄瓜耐弱光性状的QTL定位[J].分子植物育种,2004,2(6):795-799.
[25] 李效尊,潘俊松,王刚,等.黄瓜侧枝基因(lb)和全雌基因(f)的定位及RAPD遗传图谱的构建[J].自然科学选展,2004,14(11):1225-1229.
[26] 张海英,王永健,许勇,等.黄瓜育种中“血缘”遗传关系分析研究[J].华北农学报,2001,16(2):20-26.
[27] 刘殿林,杨瑞环,哈玉洁,等.不同来源黄瓜遗传亲缘关系的RAPD分析[J].华北农学报,2003,18(3):50-54.
[28] 夏立新,陈德富,等.黄瓜亲本间分子遗传距离与杂种优势的相关性[J].南开大学学报(自然科学),2001,34(2):91-94.
[29] 陈劲枫,庄飞云,逯明辉,等.采用SSR和RAPD标记研究黄瓜属(葫芦科)的系统发育关系[J].植物分类学报,2003,41(5):427-435.
[30] 庄飞云,陈劲枫.黄瓜栽培种、近缘野生种、种间杂种及其回交后代的RAPD分析[J].园艺学报,2003,30(1):47-50.
[31] 李锡香,蔚,杜永臣,等.黄瓜种质资源遗传多样性的RAPD鉴定与分类研究[J].植物遗传资源学报.2004,5(2):147-152.
[32] 齐秀丽.黄瓜自交系及其F1代的RAPD分析(硕士毕业论文).2003.
[33] 王志峰,孙日飞,孙小镭,等.山东省黄瓜地方品种资源亲缘关系的AFLP分析[J].园艺学报,2004,31(1):103-105.
[34] 王志峰,孙小镭,孙日飞,等.山东密刺类黄瓜亲缘关系研究[J].中国蔬菜,2005(2):6-8.
[35] 李锡香,蔚,杜永臣,等.黄瓜种质资源遗传多样性及其亲缘关系的AFLP分析[J].园艺学报,2004,31(3):309-314.
[36] Zhuang F Y,Chen J F.Assessment of genetic relationship samong Cucumisspp.by SSR and RAPD marker analysis[J].Plant Breeding,2004,123:167-172.
[37] 李俊英,闻颖达.黄瓜线粒体类质粒pC1,pC4在品种间的分布及同源性研究遗传[J].科学通报,2001,28(4):367-371.
[38] 康国斌,许勇,雍伟东,等.低温诱导的黄瓜ccr18基因的cDNA克隆及其表达特性分析[J].植物学报2001,43(9):955-959.
[39] 白吉刚,刘佩瑛,等.黄瓜生长素结合蛋白cDN段的克隆及其表达[J].植物生理与分子生物学学报,2002,28(3):200-204.
[40] 丁国华,秦智伟,刘宏宇,等.黄瓜NBS类型抗病基因同源序列的克隆与分析[J].园艺学报,2005,32(4):638-642.
[41] 牛林海.裂叶牵牛、玉米和黄瓜HMG基因的克隆及功能分析(硕士毕业论文).2002.
[42] 叶青静.黄瓜果实发育相关基因的克隆及其表达调控的研究(硕士毕业论文).2003.
[43] 李志英.黄瓜“花打顶”形态、解剖、细胞学特征及相关基因的分离与鉴定(博士毕业论文).2003.
[44] 梅茜.黄瓜幼果cDNA文库构建与部分ESTs分析(硕士毕业论文).2004.
[45] 娄群峰.黄瓜全雌性基因分子标记及ACC合酶基因的克隆与表达研究(博士毕业论文).2004.
[46] 王和勇.黄瓜杂交种子纯度的RAPD鉴定(硕士毕业论文).2001.
[47] 孙敏,乔爱民,王和勇,等.黄瓜杂交种子纯度的RAPD鉴定[J].西南师范大学学报(自然科学版),2003,28(2):103-107.
[48] 金红,杜胜利,陈峥,等.抗除草剂基因在黄瓜杂种纯度快速鉴定上的应用研究[J].华北农学报,2004,19(3):31-34.
[49] 王惠哲,李淑菊,庞金安,等.黄瓜上烟草花叶病毒的RT-PCR检测[J].天津农业科学,2004,10(2):11-13.
[50] 王惠哲,李淑菊,霍振荣,等.利用RT-PCR检测黄瓜上的西瓜花叶病毒[J].天津农学院学报,2004,11(4):20-22.
[51] 李淑菊,王惠哲,霍振荣,等.利用RT-PCR对黄瓜病毒病毒原种类进行检测[J].华北农学报,2004,19(3):100-102.
[52] 陈洁云.两种葫芦科病毒的分子检测和致病性研究[J].植物病理学报,2003,33(5):449-455.
[53] 何晓明,林毓娥.黄瓜子叶和下胚轴的离体培养[J].植物生理学通讯,2001,37(5):423-424.
[54] 郭德章,鄢铮,赖钟雄,等.‘翠秀’黄瓜子叶原生质体的高效培养及植株再生[J].园艺学报,2003,30(2):227-228.
[55] 侯爱菊,朱延明,杨爱馥,等.诱导黄瓜直接器官发生主要影响因素的研究[J].园艺学报,2003,30(1):101-103.
[56] 杨爱馥,朱延明,侯爱菊.几个影响黄瓜子叶体细胞胚胎发生的因素[J].植物生理学通讯,2003,39(3):206-208.
[57] 梅茜,张兴国.黄瓜组织培养研究[J].西南农业大学学报,2002,24(3):266-267.
[58] 曹利仙,赵鹂,唐宇力,等.硝酸银对黄瓜离体子叶培养芽再生的促进效应[J].甘肃农业大学学报,2001,36(2):168-171.
[59] 李云,鄢洪强,李林,等.离体培养黄瓜子叶花芽分化研究[J].内江师范学院学报,2004,19(6):86-88.
[60] 周俊辉,周家容,林毕成,等.6-BA和氨基酸对黄瓜子叶离体培养成花的影响[J].植物生理学通讯,2004,40(2):171-173.
[61] 杜胜利,魏爱民,魏惠军,等.利用生物技术创造黄瓜育种新材料方法研究[J].天津科技,2001,(2):627.
[62] 雷春,陈劲枫,钱春桃,等.辐射花粉授粉和胚培养诱导产生黄瓜单倍体植株[J].西北植物学报,2004,24(9):1739-1743.
[63] 陈劲枫,罗向东,余纪柱,等.异源三倍体黄瓜的离体繁殖和鉴定[J].植物生理学通讯,2003,39(2):109-112.
[64] 陈峥,金红,程奕,等.提高黄瓜农杆菌遗传转化体系再生频率的研究[J].天津农业科学,2001,7(4):47-49.
[65] 姚春娜,王亚馥.超声波辅助发根农杆菌对黄瓜遗传转化的影响[J].园艺学报,2001,28(1):80-82.
[66] 侯爱菊.黄瓜抗真菌基因遗传转化体系的研究(硕士毕业论文).2001.
[67] 金红,杜胜利,陈峥,等.抗除草剂转基因黄瓜的获得及T_1植株抗性鉴定[J].华北农学报,2003,18(1):44-46.
[68] 于静.CTB/CS3基因表达载体构建及对黄瓜的转化(硕士毕业论文).2003.
[69] 孙兰英.几丁质酶基因对黄瓜遗传转化的研究(硕士毕业论文).2003
[70] 赵隽,王华,潘俊松,等.黄瓜子叶节离体再生体系的研究[J].上海交通大学学报(农业科学版),2004,22(1):43-48.
[71] 邓小燕,张兴国,井鑫,等.冷诱导转录因子基因CBF3转化黄瓜的研究[J].西南农业大学学报(自然科学版),2004,26(5):603-605.
[72] 张兴国,邵长文,等.基因Cor15A和CBF3导入黄瓜基因组[J].蔬菜分子育种研讨会论文集,2004.
[73] 白吉刚,宋明,刘佩瑛,等.生长素结合蛋白cDNA的克隆及其在黄瓜中的表达[J].植物学通报,2002,19(6):705-709.
[74] 白吉刚,王秀娟,尹谦逊,等.生长素结合蛋白基因转化黄瓜的研究[J].中国农业科学,2004,37(2):263-267.
[75] 陈丽梅.黄瓜的高效再生和根癌农杆菌介导的遗传转化(硕士毕业论文).2004.
[76] 林建丽.花生白黎芦醇合酶基因表达载体构建及黄瓜遗传转化体系的初步研究(硕士毕业论文).2004.
[77] 柏锡.t2PA基因对黄瓜的遗传转化及其在不同植物中的表达效率分析和密码子改造(硕士毕业论文).2003.
