摘要:目的 探讨沉默炭疽毒素受体1(anthrax toxin receptor 1,ANTXR1)基因对γ 珠蛋白基因表达的影响. 方法构建ANTXR1 基因特异性序列的shRNA 重组质粒及阴性对照重组质粒,经酶切验证及测序鉴定后,将干扰载体和慢病毒质粒共转染入293T 细胞后收集病毒上清液,再将其转染至K562细胞中,并经puromycin 筛选稳转细胞株.通过实时荧光定量PCR 技术检测各组ANTXR1 基因和γ珠蛋白基因mRNA 的表达情况;通过Western 蛋白印迹技术检测各组ANTXR1 蛋白和γ 珠蛋白的表达情况.采用t 检验进行统计分析. 结果 获得有效干扰ANTXR1 基因的K562 稳转细胞株,实时荧光定量PCR 结果显示,ANTXR1-shRNA 实验组中ANTXR1 基因和γ 珠蛋白基因mRNA 相对表达水平分别为0.19±0.02 和1.46±0.24;Western 蛋白印迹技术结果显示,蛋白相对表达水平分别为0.20±0.01和1.45±0.14.ANTXR1-shRNA 实验组与阴性对照组、空质粒载体组和空白对照组相比,ANTXR1 基因相对低表达,γ 珠蛋白基因相对高表达,差异均有统计学意义(P ﹤ 0.05). 结论靶向沉默ANTXR1基因后,促进γ 珠蛋白基因mRNA 和蛋白水平的表达.
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