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扩散序谱(DOSY)实验测定缓冲体系中蛋白质表观分子量

作者:李红卫; 袁志良; 夏斌 北京大学北京核磁共振中心; 北京100871; 北京大学化学与分子工程学院; 北京100871; 北京大学生命科学学院; 北京100871

摘要:液体核磁共振扩散序谱(DOSY)可以通过测定溶质分子的自扩散系数(Dt)来研究该分子在溶液中的表观分子量(M).Dt与测试体系和分子本身性质相关,蛋白质体系较为复杂,从而增加了蛋白质自扩散系数(Dt-protein)测定的难度.本文以3-(三甲基硅基)丙磺酸钠(DSS)为内标,以蛋白质分子与DSS自扩散系数的比值(Dr)来表征蛋白质分子在溶液中的表观分子量(Mprotein),该方法降低了缓冲体系对Mprotein的影响,使得Mprotein主要由分子本身的性质决定.在此基础上,测定了不同分子量蛋白质分子相对于DSS的Dr,拟合得到了Dr与Mprotein的相关关系:lgMprotein=-2.6488 lgDr-0.7863,相关系数(R^2)为0.997.最后测定了通过大肠杆菌表达纯化得到的SARS冠状病毒主蛋白酶C端结构域(M^pro-C)分子相对于DSS的Dr,并计算出与文献结果一致的Mprotein,进一步验证了拟合公式的准确性和实用性.

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